尼罗罗非鱼（oreochromis niloticus）催乳素（prl）及其受体（prlr）的cdna克隆及表达分析

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1、中山大学硕士学位论文尼罗罗非鱼（Oreochromisniloticus）催乳素（PRL）及其受体（PRLR）的cDNA克隆及表达分析姓名：龙梓洁申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：林浩然;刘晓春20060601中山大学硕士学位论文龙梓洁论文题目：尼罗罗非鱼(Oreochromisnilo打cus)催乳素(PRL)及其受体(Plu二R)的cDNA克隆及表达分析专业：水生生物学硕士生：龙梓洁导师：林浩然院士摘要PRL是一种多功能的单链多肽激素，属于GI-I／PRI_／SL蛋白家族。在高等的脊椎动物中，PRL与生物体的盐水平衡、生

2、长发育、内分泌和代谢、脑和行为、繁殖以及免疫调控有关。它在生物体内分布广泛，主要通过与靶组织细胞表面的特异膜受体相互作用，启动信号传导来发挥作用。本论文以尼罗罗非鱼这一经济鱼类为研究对象，克隆了两种PRL和PRL受体的cDNA，并检测它们的基因表达在鱼体中的时间和空间分布，着重了解两种不同的PRLR在罗非鱼中的调控作用，对这一经济鱼类生长和繁殖的内分泌学进行研究，从而有助于掌握其生长繁殖方面的特点，更好地为生产服务。采用RT-PCR方法分别克隆了尼罗罗非鱼PRLl，PRL2，PRLRl以及PRLR2基因的cDNA序列。PRLl的开放阅

3、读框为639bp，共编码212个氨基酸；PRL2的开放阅读框为603bp，共编码200个氨基酸；PRLRl的开放阅读框为1893bp，共编码630个氨基酸：PRLR2的开放阅读框为1590bp，共编码529个氨基酸。根据GenBank中其它鱼类相关基因的氨基酸序列进行相似性比较并构建分子系统进化树，结果与根据传统的形态学和生化特征分类进化地位基本一致。PRLR2cDNA全长2011个碱基，包括5’端非翻译区(uTR)217个碱基和3’UTR204个碱基，经SMART分析，该cDNA编码的的多肽链序列具有以下特点；前27个氨基酸为信号肽

4、；序列内部23个亲水氨基酸为跨膜区；细胞外区由206个氨基酸组成，四个潜在的N一糖基化位点分别位于成熟肽的85、106、i54、和192位氨基酸处；细胞内区由273个氨基酸组成，8个可被酪氨酸激酶磷酸化的酪氨酸残基分别位中山大学硕士学位论文龙梓洁于第237、286、296、382、396、432、462和第492位氨基酸上。用DNAstar对尼罗罗非鱼鱼和其它13种脊椎动物的PRLR前体蛋白和成熟蛋白的细胞外区、细胞内区和跨膜区进行同源性分析，发现它与金头鲷的同源性最高；对脊椎动物各种形式的PRLR前体进行系统进化分析，发现该受体与金

5、头鲷的亲缘关系最近。通过与尼罗罗非鱼PRLRl进行比较，发现PRLR2和并非PRLRl来自同一个前体的不同剪接形式，而是由不同基因编码的。同时我们在卵巢中克隆得到一个只有细胞内区的短型的PRLR2，共编码83个氨基酸。根据已获得PRLRl、PRLR2基因的cDNA序列设计各自的特异引物，比较各组织f垂体、下丘脑、端脑、中脑、后脑、鳃、心脏、头肾、肝脏、脾脏、肾脏、性腺、胃、肠、肌肉1基因表达量的差异，发现PRLRl、PRLR2在鳃，肾脏、肠、性腺均有较大量表达。Northern杂交分析发现在尼罗罗非鱼的卵巢中存在两种不同的PRLR2转

6、录本，这与我们克隆得到了两种PRLR2相一致。由于催乳素在动物的性腺发育及繁殖中具有重要的作用，为了探讨两种不同催乳素受体在性腺发育过程中的表达差异，通过实时PCR方法，比较了不同性腺发育阶段尼罗罗非鱼性腺催乳素受体的表达差异，发现无论雌鱼还是雄鱼，两种受体的mRNA的表达量均为成熟期最高，而且PRLR2在各时期的表达量均高于PRLRl。检测了注射LHRH—A之后，尼罗罗非鱼卵巢中两种受体mRNA表达量的变化，结果发现无论雌鱼还是雄鱼，注射LHRH．A12小时后PRLRmRNA表达量达到高峰，之后有所下降，其中雌鱼的PRLR2变化最为

7、明显，与对照组相比有了显著的增加。注射E2和MT对雌鱼的PRLR作用不明显，但能提高雄鱼的PRLRl，PRLR2的表达量。关键词：尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)、催乳素(PRL)、催乳素受体(PRLR)、cDNA克隆、基因表达II中山太学硕士学位论文龙梓洁Prolactinandprolactinreceptoroftilapia(Oreochromisniloticus)：cDNAcloningandmRNAexpressionMajor：HydrobiologyName：Long蜀ieSupervisor：

8、ProLLinHaoran(Academician)AbstractThecDNAsequenceencodingtheprolactin(PRL)andprolactinreceptor(PRLR)oftilapiaw