快速老化小鼠听功能、耳蜗ngfr trka的增龄性变化以及ngf转染骨髓基质干细胞的培养

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3、kA的增龄性变化以及NGF转染骨髓基质干细胞的培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1ABSTRACT．⋯．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．⋯．⋯．3英汉缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8一日IJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．121．1实验仪器与材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．121．2实验试剂⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．131．3实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．142结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．232．1SAMP8小鼠听性脑干反应(ABR)阈值增龄性变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯232．2各月龄小鼠耳蜗螺旋神经节细胞、毛细胞TrkA的表达⋯⋯⋯⋯．232．3BMSC形态及BMSC之NGF免疫组化染色情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．253讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．293．1神经生长因子受体TrkA生物学特性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．303．2快速老化小鼠耳蜗神经生长因子受体TrkA增

5、龄性变化⋯⋯⋯⋯．3l3．3骨髓基质干细胞与老年性耳聋⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．323．4NGF生物学特性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．333．5NGF转染BMSC的培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．354结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．37参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．38综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．46攻读学位期间发表的学术论文目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．61快速老化小鼠听功能、耳蜗NGFRTrkA的增龄性变化以及N

6、GF转染骨髓基质干细胞的培养中文摘要目的：探讨快速老化小鼠听觉功能、耳蜗组织中神经生长因子受体酪氨酸激酶受体A(nervegrowthfactorreceptorTrkA，NGFRTrkA)表达的增龄性变化以及NGF转染骨髓基质干细胞的培养，为老年性耳聋发病的分子机制和基因治疗提供理论基础。方法：该研究选用3、5、7月龄的快速老化小鼠亚系8(SAMP8)作为观察对象。采用听觉诱发反应仪检测其8kHz短纯音ABR阈值；应用免疫组化染色检测NGFRTrkA在耳蜗组织中的表达情况，并应用光密度检测分析其增龄性变化特点。将欲

7、转染的小鼠骨髓基质干细胞分为四组：A组为脂质体2000包裹的重组质粒转染组；B组为脂质体转染组；C组为脂质体包裹的空质粒转染组；D组为含10％胎牛血清的D肛M／F12培养液的阴性对照组。按质粒提取试剂盒说明提取含NGF重组质粒的阳性克隆大肠杆菌，将提取的重组质粒经限制性内切酶HindIIIandXhoI双酶切鉴定后，采用脂质体LipofectamineTM2000转染方法将含有人B-NGF神经生长因子的重组质粒转染至小鼠骨髓基质干细胞中，于转染48小时后用4％多聚甲醛固定各组细胞并通过细胞免疫组化染色检测NGF的表达

8、情况。结果：1、各组SAMP8小鼠听性脑干反应阈值(ABR)分别为：3月龄S／LI妊P8小鼠：左耳为31．667±2．582，右耳为32．500±2．739；5月龄SAMP8小鼠：左耳为54．167±2．041，右耳为53．333±2．582；7月龄SAMP8小鼠：左耳为58．333±2．582，右耳为58．333±2．582。5月龄与3月龄进