欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:33619182
大小:12.08 MB
页数:130页
时间:2019-02-27
《巨噬细胞内rheb1敲除对小鼠机体代谢的调节作用及机制探讨》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、万方数据中图分类号毯三墨UDC6lO八年制博士学位论文巨噬细胞内Rhebl敲除对小鼠机体代谢的调节作用及机制探讨TheeffectandmechanismofRhebldeletioninmacroplaagesonregulationotmetabolisminmicell’no‘●作者姓名:贺洁宇学科专业:临床医学研究方向:内分泌与代谢病学院、系(所):湘雅二医院指导教师:刘峰副指导教师:胡芳、戴如春论文答辩日期望!!:三:望中南大学二0一四年五月万方数据原创性声明本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
2、尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名:学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文;学习可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将
3、本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。储虢嶂翩签名甾嘞一年』月4日万方数据八年制医学教育中文摘要摘要第一部分roTOR信号通路受抑制对巨噬细胞极化和炎症因子分泌的影响目的巨噬细胞在受到炎症信号、应激、代谢物等刺激下会向促炎性(M1型)或抗炎性(M2型)方向极化,并呈现不同水平的促炎性或抗炎性媒介分泌谱。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/雷帕霉素机能靶蛋白(Mammalian/MechanisticTargetof雷帕霉素,mTOR)信号通路是生长、发育、代谢、免疫、癌症等生理活动的主要调控者,本研究旨在探讨雷帕霉素
4、作用导致的mTOR信号通路改变对脂多糖(Lipopolyrsaccharide,LPS)、棕榈酸(Palmiticacid,PA)及油酸(Oleicacid,OA)刺激下巨噬细胞的M1/M2极化趋势及相应的炎症介质分泌的.影响。方法将Raw264.7小鼠巨噬细胞稳定株均匀铺板后,分成以下几组:①未干预组:②刺激物单独干预组;(§)mTOR信号通路抑制剂雷帕霉素干预组;④刺激物+雷帕霉素共同干预组。刺激物分别为LPS、PA和OA,选取最佳干预物浓度和作用时间进行干预试验,干预结束后收集细胞提取mRNA,通过qRT.PCR检测巨噬细胞募集、促炎及抗
5、炎相关基因的表达。结果①在LPS诱导经典的促炎性模型中,与未干预组相比,LPS刺激显著提高促炎性因子IL.1p的水平,而雷帕霉素刺激也可促,进IL.1p的表达,两者共同刺激时对基因的表达具有叠加效应。②I与未干预组相比,PA单独刺激可显著提高IL.1p水平;雷帕霉素刺激可抑制巨噬细胞募集相关基因MCP.1的表达,同样两者共同刺激万方数据八年制医学教育中文摘要对于IL.1p表达的促进和MCP.1表达的抑制有叠加作用。③与未干预组相比,OA单独刺激可促进IL.113及Mrcl表达;而加用雷帕霉素能显著抑制OA对MCP.1的正调控作用,同样对于IL.
6、1p与Mrcl表达的促进有叠加作用。结论LPS、PA及OA都能够诱导巨噬细胞M1型极化,促进促炎因子的分泌;mTOR信号通路抑制也可诱导巨噬细胞M1型极化,促进促炎性因子分泌,促进部分抗炎性介质的分泌。关键词Raw264.7,巨噬细胞,极化,mTOR,雷帕霉素II万方数据八年制医学教育中文摘要第二部分巨噬细胞特异性敲除Rhebl蛋白对高脂诱导的肥胖小鼠整体代谢水平的影响目的建立巨噬细胞Rhebl敲除的小鼠模型,通过高脂喂养建立肥胖小鼠模型,研究巨噬细胞Rhebl敲除的小鼠对高脂诱导的肥胖及糖脂代谢的作用。方法构建并通过提取尾尖DNA电泳、分离原
7、代巨噬细胞行qPCR及Western.Blot等方式鉴定Rhebl巨噬细胞敲除小鼠模型。将5-6周龄敲除小鼠(Ko小鼠,实验组)与同窝野生型Rhebln删nox小鼠(WT小鼠,对照组)分别进行4个月高脂食物饲养(high.fatdiet,心D)和普通食物喂养(normaldiet,ND)。实验结束后检测小鼠体重和食物消耗量,通过GTT及ITr检测小鼠葡萄糖耐受及胰岛素敏感性情况。通过大体和切片HE染色、油红O染色及免疫荧光等手段观察肝脏、脂肪及肌肉的形态学改变。结果①通过尾尖提取DNA经PCR扩增及琼脂糖电泳、提取原代巨噬细胞mRNA后行qRT
8、.PCR以及提取蛋白行Western.Blot试验鉴定Rhebln。枷。xF4/80CreTg/0(KO)与Rheblno√nox(WT)两种基因型。
此文档下载收益归作者所有