中医药干预载脂蛋白e基因敲除小鼠巨噬细胞泡沫化机制研究

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1、中医药干预载脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞泡沫化机制研究张文高（山东中医药大学）刘美霞（中国中医科学院西苑医院）刘龙涛（中国中医科学院西苑医院）姜浩（北京中医药大学）朱莹（广东省中医院）吴敏（中国中医科学院广安门医院）2011年11月19日河南郑州相关课题获得的基金资助国家自然科学基金（30472275）高等学校博士学科点专项科研基（20060441002）中国博士后科学基金（20070410622）重视对动脉粥样硬化泡沫化细胞形成的干预研究中医药干预载脂蛋白E基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化及其机制研究本

2、研究成果的临床应用提纲第一部分重视对动脉粥样硬化泡沫化细胞形成的干预研究背景动脉粥样硬化（As）心脑血管疾病共同的病理基础国内外心脑血管领域探讨的热点和重点泡沫细胞的生物学特征泡沫细胞是As斑块内特征性病理细胞是As的早期标志在形态学上，细胞浆内脂质成分明显增多，并聚集成滴，镜下可见胞浆呈泡沫样改变；细胞内总胆固醇增加，且胆固醇酯占总胆固醇的一半以上。两种来源的泡沫细胞As泡沫化细胞单核巨噬细胞泡沫化平滑肌细胞泡沫化As斑块内特征性病理细胞As的早期标志主要产生于As损伤的早期是中后期As病变的主要病理

3、细胞成分炎症介质与泡沫细胞形成内源性炎症介质氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）及外源性炎症介质脂多糖（LPS）均能促进、诱导泡沫细胞的形成。抑制泡沫细胞形成是阻止As发生发展的重要途径大量泡沫细胞堆积形成脂质条纹乃至脂质斑块；斑块的进一步破裂、出血及血栓形成会导致各种心脑血管事件的发生。泡沫细胞形成是As发生发展的关键环节。抑制泡沫细胞形成是阻止As发生及进一步发展的重要途经。对泡沫细胞的早期积极干预是防治As及相关心脑血管疾病的重要途径。前期研究的回顾脂欣康干预SD大鼠血管平滑肌细胞泡沫化的研究脂欣

4、康胶囊人参皂苷银杏叶提取物三七总皂苷牛磺酸茶多酚功效成分组方中医药功效：益气活血解毒化浊平滑肌细胞的培养与鉴定VSMC的培养鉴定VSMC萌出10x40纯化VSMC10x40α-smoothmuscleactin免疫荧光化学染色显示肌丝10x40ox-LDL诱导细胞泡沫化及鉴定油红O染色观察VSMC内脂质10x40平滑肌细胞泡沫化平滑肌细胞培养ox-LDL培养48h油红O染色后，镜下可见细胞内有大小不等的脂滴，胞浆呈泡沫样改变，高效液相色谱法检测，胆固醇酯占总胆固醇的60%以上，表明平滑肌细胞泡沫化成功分

5、组及制备含药血清20只200g左右雄性SD大鼠随机分为5组脂欣康组血脂康组洛伐他汀组罗格列酮组生理盐水组灌胃5天取血，制备含药血清研究分组A脂欣康组B血脂康组C洛伐他汀D罗格列酮组E生理盐水组F空白对照组——不加含药血清分别加入含药血清含药血清干预时间——48小时对泡沫细胞内总胆固醇含量的影响各组平滑肌源性泡沫细胞内总胆固醇含量比较高效液相色谱法检测胆固醇含量（高效液相色谱法）对泡沫细胞内胆固醇酯含量的影响各组平滑肌源性泡沫细胞内胆固醇酯含量比较高效液相色谱法检测胆固醇酯含量（高效液相色谱法）对总胆固醇

6、与胆固醇酯比值的影响空白对照组生理盐水组洛伐他汀组罗格列酮组血脂康组脂欣康组总胆固醇与胆固醇酯的比值62.75%63.46%47.63%42.25%38.04%37.13%激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca2+浓度光镜观察空白对照组10x40生理盐水组10x40洛伐他汀组10x40脂欣康组10x40血脂康组10x40罗格列酮组10x40激光共聚焦显微镜观察图像对细胞内Ca2+浓度的影响各组平滑肌源性泡沫化细胞内Ca2+浓度的平均荧光强度值激光共聚焦显微镜检测泡沫细胞内Ca2+浓度（激光共聚焦显微镜）对VSM

7、C源性泡沫细胞内CD36mRNA表达的影响光镜观察空白对照组10x40生理盐水组10x40洛伐他汀组10x40脂欣康组10x40血脂康组10x40罗格列酮组10x40原位杂交法检测B类清道夫受体CD36mRNA表达（原位杂交法）对VSMC源性泡沫细胞内CD36mRNA表达的影响各组平滑肌源性泡沫细胞内CD36mRNA表达比较B类清道夫受体白细胞分化抗原36配体（CD36）（原位杂交法）小结脂欣康具有与洛伐他汀等相似的显著降低总胆固醇及胆固醇酯含量的作用，并且胆固醇酯与总胆固醇的比值均降至50%以下；脂欣

8、康具有与洛伐他汀相似的抑制平滑肌源性泡沫细胞内CD36mRNA表达的作用，并且优于洛伐他汀；脂欣康可显著降低平滑肌源性泡沫细胞内的Ca2+浓度，优于洛伐他汀及血脂康。小结脂欣康与血脂康均显著抑制ox-LDL诱导的VSMC泡沫化，从而抗As斑块形成，并有助于稳定斑块。其作用机制：调脂、改善脂质代谢降低细胞内钙负荷抑制细胞内CD36mRNA的表达中医药对As泡沫化细胞干预研究其它学者研究工作抗氧化As泡沫化细胞调节血脂抑制炎症介质减少细胞外基质