小胶质细胞乳铁蛋白的表达及其对腹侧中脑神经元的作用研究

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1、小胶质细胞乳铁蛋白的表达及其对腹侧中脑神经元的作用研究摘要帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)是一种常见的中枢神经系统退行性疾病，l临床表现主要有静止性震颤、肌僵直、运动减少和姿势反射障碍等症状。PD的神经病理学基础是黑质致密带(substantianigraparscompacta，SNpc)多巴胺(dopamine，DA)能神经元的变性脱失以及由此而导致的纹状体DA含量降低。PD的病因目前尚未完全明了，与遗传因素、环境因素、氧化应激、兴奋性毒素、自身免疫、黑质(substantianigra，SN)铁聚积和细胞凋亡等多种因素有关。PD患者的中脑SNpc

2、有大量的激活的小胶质细胞，这些激活的小胶质细胞和残存的DA能神经元又有大量的铁沉积，然而小胶质细胞激活和铁聚积之间的关系尚未阐明。乳铁蛋白(1actoferrin，Lf)是一种铁结合性糖蛋白，属于转铁蛋白家族成员之一，由许多外分泌腺分泌，存在于人类和其他哺乳动物的泪液、唾液、乳汁和嗜中性粒细胞中。乳铁蛋白受体(1actoferrinreceptor，LfR)广泛存在于人体内的不同组织和细胞类型中，其作用是通过受体介导的内吞参与Lf内化。Lf可以结合转运三价铁离子，是铁在机体内代谢及转运的关键载体。Lf还具有广泛的生物学功能：抗氧化应激，抗癌，调控免疫炎症反应等，可能与其铁结

3、合特性无关。在体内Lf主要以两种形式存在：不含铁形式(apo．1actoferrin，apo．Lf)和铁饱和形式(holo—lactoferrin，holo-Lf)。在脑内只有激活的小胶质细胞合成释放LC1-甲基_4一苯基．1，2，3，6一四氢吡啶(1-methyl·4-phenyl-l，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP)模型小鼠中LfmRNA的表达水平升高。LfR主要在神经元上表达，脑组织染色发现PD患者中脑的神经元和微血管中LfR反应性表达增加，提示Lf／LfR与PD铁聚积和神经元进行性退化之间有一定关联性。本研究应用原代培养的大鼠小胶质细胞、

4、腹侧中脑神经元及神经毒素MPTP制各的PD小鼠模型，采用酶联免疫吸附实验、实时荧光定量PCR、流式细胞仪技术、免疫荧光、免疫印迹、高效液相色谱法、激光共聚焦扫描技术等多项研究方法，探讨了铁对激活的小胶质细胞合成释放Lf的影响以及Lf对神经毒素1一甲基．4．苯基吡啶阳离子(1-methyl-4一phenylpyridiniumion，Mpp+)损伤的腹侧中脑神经元及MPTP诱导的PD模型小鼠发挥保护作用的可能机制。结果如下：1．100Imaol／LMPP+或800ng／ml的脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)处理原代培养的小胶质细胞24h，Lf的释放量显著

5、增]JI(P<0．05)。100pmol／L的枸橼酸铁铵(ferricammoniumcitrate，FAC)预处理12h可显著增加其释放量，差别有统计学意义(P<0．05)。2．100I_unol／LFAC预孵育12h后，分别加入100I．unol／LMPP+或800ng／mlLPS处理24h，小胶质细胞中LfmRNA的表达明显升高，与对照组相比，差别有统计学意义(尸<0．05)。3．100}tmol／LMPP+处理原代培养的VM神经元24h后，细胞线粒体跨膜电位差(mitochondrialtransmembranepotential，△甲m)明显降低，与正常对照组相比

6、，差别有统计学意义(P

7、)；100ng／mlapo-Lf和100ng／mlholo-Lf预处理后，可明显拮抗MPP+引起的SOD蛋白水平下调，与单纯MPP+组相比，差别有统计学意义帜O．05)。7．100pmol／LMPP十处理原代培养的VM神经元24h后，细胞内Bd一2蛋白水平下调，与正常对照组相比，差别有统计学意义(尸<0．05)：而100ng／mlapo—Lf和100ng／mlholo．Lf预处理后，可明显拮抗MPP+引起的Bcl．2蛋白水平下调，Bcl．2／Bax比值升高，与单纯MPP+组相比，差别有统计学意义(尸