微小rna在人胚胎干细胞向胰岛样细胞分化过程中表达的变化

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1、万方数据·654·±垦蕉垦塞垒查!!!!堡!旦箜!!鲞笙!塑堡堕!』堕!!!!塑!塞丛竺!竺!!!!!Y!!：!!!丛!：!·糖尿病分子生物学与遗传学·微小RNA在人胚胎干细胞向胰岛样细胞分化过程中表达的变化魏蕊刘国强洪天配杨进侯文芳高美娟娄晋宁陈贵安【摘要】目的观察微小RNAs(miRNAs)在人类胚胎f细胞(hES细胞)向胰岛样细胞定向分化过程中的表达及其变化趋势。方法采用改良的定犁内胚层途径的诱导方案将hES细胞诱导分化为胰岛样细胞；利用免疫荧光染色和实时定量PCR分析对诱导分化不同阶段的细胞进行鉴定；采用苇环结构的实时定量PCR方法观察诱导分化后细胞中3种miRNAs的表达，并与

2、成人胰岛进行比较。结果hES细胞通过定型内胚层途径的诱导方案可在体外诱导分化为表达胰岛素、C一肽及胰多肽的胰岛样细胞。miR一7、miR一145及miR一375在hES细胞和诱导分化最后阶段的细胞中的表达水平较成人胰岛减低。结论通过现行的体外诱导分化方案所获得的胰岛样细胞不是成熟的胰岛细胞，miR一375等miRNAs表达水平低是其特征之一。【关键词】胚胎干细胞；胰岛；微小RNAdoi：10．3969／j．issn．1006—6187．2010．09．005ExpressionofmicroRNAsduringdifferenciationoftheislet-likecellsindu

3、cedfromhumanembryonicstemcellsWUJRui，LIUGuo-qiang，HONGTian—pei，eta1．ClinicalStemCellResearchCenter。PekingUniversityThirdHospital，Beijing100191，ChinaCorrespondingauthor：LfUGuo-qiang，E-mail：liuguoqiang@巧mu．edu．cn[Abstract]ObjectiveToinvestigatewhethermicroRNAs(miRNAs)wereexpressedbyislet-likecellsd

4、ifferentiatingfromhumanembryonicstem(hES)cells．MethodsIslet—likecellswereinducedfromhEScellsbyusinganimprovedstepwiseprotocolsofdefinitiveendoderm．ImmunofluorescencestainingandrealtimequantitativePCRanalysiswereusedtoidentifytheexpressionofisletcell—specificmarkersindifferentiatedcellsatdifferent

5、stages．ThedifferenceintheexpressionofthreemiRNAswasanalyzedbystem-looprealtimequantitativePCRanalysisinthedifferentiatedcellsascomparedwithadulthumanislets．ResultsIslet-likecellsexpressinginsulin，C-peptideandpancreaticpolypeptidecouldbegeneratedfromhEScellsviathein-vitrodifferentiationprotocolsof

6、definitiveendoderm．TheexpressionlevelsofmiR一7，miR一145andmiR一375ineitherthehEScellsortheislet—likeceilswerelowerthanthoseinadulthumanislets．ConclusionsTheislet—likecellsderivingfromhEScellsviathepresentdifferentiationprotocolsarenotmaturepancreaticisletcells，whichischaracterizedbytheloweredexpress

7、ionIevelsofmiR一375andothermiRNAs．[Keywords]Embryonicstemcells；Pancreaticislet；microRNA胰岛移植被普遍认为是治愈糖尿病潜在的希望，基金项目：国家863计划资助项目(2006AA02A112)；国家自然科学基金资助项目(30771032。30700879，81070701)l国家973计划资助项目(z006CB503900)作者单位：100191北京大