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1、702生理学报ActaPhysiologicaSinica,December25,2014,66(6):702–708DOI:10.13294/j.aps.2014.0083http://www.actaps.com.cn研究论文microRNA在胚胎干细胞分化的心肌细胞中的表达变化*****陈斐，陈忠炎，杨黄恬上海交通大学医学院/中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所，中国科学院干细胞生物学重点实验室，上海200031摘要：胚胎干细胞(embryonicstemcells,ESCs)具有自我更新和多向分化的特性。近年研究显示转录后调控包括m
2、icroRNAs(miRNAs)的调控在ESC心肌细胞分化(ESC-derivedcardiomyocytes,ESCM)命运决定中起着重要作用。然而对决定ESC分化命运的miRNAs的了解还非常有限。为了进一步认识miRNAs对心肌细胞分化的调控作用，本研究采用经典的悬滴法诱导小鼠ESC(mESC)分化成心肌细胞，采用安捷伦8×15k小鼠miRNAs芯片(miRbaseV16.0)比较了富含跳动心肌细胞区域与非跳动区域miRNAs表达谱的异同，发现与非跳动区域相比，跳动区域中有19个miRNAs发生了5倍以上的表达变化(n=3,P<0.05)，
3、其中5个miRNAs表达上调、14个miRNAs表达下调。采用定量RT-PCR进一步分析了miRNAs芯片中差异倍数大于10的miRNAs，证明miR-196a，miR-196b和miR-467e在心肌细胞跳动区域的表达丰度明显低于非跳动区域(n=3,P<0.05)。用TargetScan数据库对miR-196a和miR-196b进行靶基因预测，发现其可能与心肌细胞分化呈负相关，提示其在ESC分化命运决定中可能具有一定的调控作用。这些结果为进一步明确miRNAs在ESC分化的心肌细胞中的作用提供了新线索。关键词：小鼠胚胎干细胞；microRNA；
4、心肌细胞；microRNA芯片；分化中图分类号：Q28ExpressionprofileofmicroRNAsinthecardiomyocytesderivedfrommouseembryonicstemcells*****CHENFei,CHENZhong-Yan,YANGHuang-TianKeyLaboratoryofStemCellBiology,InstituteofHealthSciences,ShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine(SJTUSM)&ShanghaiInstitutesf
5、orBiologicalSciences(SIBS),ChineseAcademyofSciences(CAS),Shanghai200031,ChinaAbstract:Embryonicstemcells(ESCs),derivedfromtheinnercellmassofblastocysts,areself-renewingandpluripotentcellswiththeabilitytodifferentiateintoallderivativesofthreeprimarygermlayers,includingcardiomy
6、ocytes.RecentstudieshaverevealedthatposttranscriptionalregulationsoflineagespecificgenesbymicroRNAs(miRNAs)emergeasanewclassofcellfateandlineagedeterminantsofESCs.However,themiRNAsthatcontrolESCdifferentiationarestilllargelyunexplored.Inthepresentstudy,weaimedtoidentifymiRNAs
7、thatmightbeinvolvedincardiacdifferentiationofESCs.Usingahangingdroptechnique,mouseESCs(mESCs)weredifferentiatedintocardiomyocytes.WethenusedtheAligentmiRNAschip(miRbaseV16.0)toevaluatemiRNAexpressionlevelsbetweentheESC-derivedbeatingareaenrichedwithcardiomyocytesandnon-beatin
8、garea.Theexpressionlevelsof19miRNAschangedover5-foldbetweentwoareas(
