快速检测伪狂犬病毒荧光定量pcr技术建立及应用-virologicasinica

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1、第21卷5期中国病毒学21（5）：485-4892006年9月VIROLOGICASINICASeptember2006*快速检测伪狂犬病毒荧光定量PCR技术建立及应用111**12万超，温国元，潘兹书，张楚瑜，熊中良，22杨峻，艾地云(1.武汉大学生命科学学院，病毒学国家重点实验室，湖北武汉430072；2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，湖北武汉430209)DevelopmentofFluorescentQuantitativePCRMethodtoRapidlyDetectPseudorabiesVirus111**12W

2、ANChao，WENGuo-yuan，PANZi-shu，ZHANGChu-yu，XIONGZhong-liang，22YANGJun，AIDi-yun.(1.CollegeofLifeSciences,StateKeyLaboratoryofVirology,WuhanUniversity,Wuhan430072,China;2.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryScience,HubeiAcademyofAgriculturalScience,Wuhan430209,China)Ab

3、stract：AfluorescentquantitativePCR(FQ-PCR)methodbasedonsequencesoftheconservedgEofthePRVgenomewasestablishedandevaluatedafterselectionofoptimalreactionconditions.ApairofprimersandafluorescentTaqManprobespecificforgEgeneweredesignedandused.WecomparedtheFQ-PCRassaytocon

4、ventionalvirusculturetechniquesandPCRtest.Accordingto2ourresults,thedynamicrangeoftheFQ-PCRassayisbetween1.0×10copies/µLand721.0×10copies/µL,andthelowestDNAconcentrationofdetectionis1.0×10copies/µL,whichis10foldbetterthanregularPCRandalsoavoidsnon-specificamplificatio

5、noccasionallyseeninregularPCR.Wetested66specimensfromdifferentpigfarmsinHubei,HenanandGansuin2005bytheFQ-PCRassayandisolatesofPRVwerefoundin42samples(63.6%).Inconclusion,theFQ-PCRmethodisrapid,sensitive,specificandaccurateandcanbeusedtorapidlydetectwildtypePRVfrompig’

6、stissuesandrespiratorspecimens.Keywords：Pseudorabiesvirus(PRV);FluorescentquantitativePCR;Quantitativedetection摘要：以伪狂犬病毒(PRV)保守的gE基因序列为参考，设计、优化出一对特异的PCR引物和一条TaqMan荧光探针，结合RotorGene检测系统，建立一种快速定量检测伪狂犬病毒的荧光定量PCR技术。该方法线形范围为2721.0×10-1.0×10拷贝/µL，灵敏度达10拷贝/µLDNA，比常规PCR高10倍。检测

7、的特异性明显高于常规PCR，同时避免了常规PCR因电泳造成的污染。应用该技术检测66例猪组织或鼻咽拭子样品，阳性42份，阳性检出率为63.6％(42/66)。与病毒分离培养、常规PCR相比较结果显示，该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能定量检测等优点，该方法可用于猪场PRV感染的快速定量检测和肉类食品进出口检疫。关键词：伪狂犬病毒；荧光定量PCR；定量检测中图分类号：R373.9文献标识码：A文章编号：1003-5125(2006)05-0485-05收稿日期：2006-04-02，修回日期：2006-04-24∗基金项目：“

8、十五”国家科技攻关专项(2001BA804A22)作者简介：万超(1980-)，男，博士生，主要从事动物病毒病预防与控制技术研究。**通讯作者.Correspondingauthor.Tel:027-68752833;E-mail:zspan@wh