多胺参与白念珠菌耐药机制研究

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1、蒡▲乍睡犬硕士学位论文多胺参与白念珠菌耐药机制研究Themechanismofpolyaminesinresistancein20111332答辩日期：星Q!垒生墨旦二。一四年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名桃矿面久日期：沙f够年占月夕日学位论文版权使用授权声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，第二军医大学有权保留并向国家有关部

2、门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文全文或部分内容编入《中国学位论文全文数据库》、《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》等数据库进行检索。可以采用影Ep、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名桃一搬聊签名：兰喙7日期：如1烀矽月弓日日期：如肛年舌月乡日目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．一卜Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．-3一缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一5-前

3、言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．6．刚舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．--第一部分多胺参与白念珠菌耐药作用研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．一11一一、实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-11一二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．-12一三、统计学处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-15一四、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-15一五、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-21-第二部分多胺参与白念珠菌耐

4、药机制研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．一23-一、实验材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一23-二、统计学处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-32一三、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-32-四、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．一42一结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一46．参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-47一在读期间发表论文和参加工作情况说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．64．致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．一

5、65．多胺参与白念珠菌耐药机制研究手葡要随着抗真菌药物的广泛使用，由耐药菌株所导致临床真菌感染治疗失败的病例越来越多，白念珠菌(Candidaalbicans)是深部真菌感染的主要病原菌。因此，阐明白念珠菌耐药机制对于临床真菌感染治疗具有重要意义。前期白念珠菌代谢组学研究发现，在AraB处理组中多胺含量均明显升高。已知多胺是一类含有氨基的脂肪族类化合物，主要包括腐胺(putrescine)、亚精胺(spermidine)和精胺(spermine)，多胺在植物抗逆性和细菌耐药性方面发挥重要作用，同时能够刺激白念珠菌菌丝形成。因此，我们推测多胺可能参与白念珠菌耐药过程。本课题中，分别将精胺、

6、亚精胺和腐胺与氟康唑、咪康唑、卡泊芬净、制霉菌素、两性霉素B(AraB)和紫草素合用作用于白念珠菌，观察其生长情况。结果发现多胺能够拮抗卡泊芬净、制霉菌素、AmB和紫草素的抗真菌效果，采用生长曲线和生存率实验考察多胺作用，证实多胺可以显著拮抗AmB抗真菌作用。采用XTT还原法检测多胺是否影响AraB抗生物被膜活性。结果表明，精胺、亚精胺和腐胺均可以拮抗AmB抗生物被膜活性，并且这种拮抗作用与多胺呈剂量依赖性。为明确多胺在白念珠菌应对AraB刺激中的作用，采用内源敲除SPEl基因(＆汪j为多胺合成关键基因)与外源添加多胺的方法考察白念珠菌对AmB的敏感性，结果显示，SPEl敲除菌对AmB更

7、为敏感，而外源添加多胺则可以降低SPEl敲除菌对Arab的敏感性。这表明，多胺可降低白念珠菌对AraB敏感性，诱导白念珠菌耐药性形成。本课题从氧化应激和生物被膜形成两方面来阐明多胺参与白念珠菌耐药机制。采用DCFH．DA染色方法检测白念珠菌胞内活性氧含量，采用RealTimeRT．PCR实验检测氧化还原相关基因表达水平，结果显示精胺、亚精胺和腐胺与AmB合用能显著降低AmB引起的胞内活性氧含量升高，同时能下调SOD2、SOD5、EB