基于调控转录因子及其基因表达探讨天灸防治哮喘的机制

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1、广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名擞日期：o，0f￥年■月7徊关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权

2、广州中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名翠论文导师签出日期：’／of∞年1月巧日摘要目的：建立哮喘大鼠模型，观察大鼠哮喘症状、体征、气道组织病理学和支气管形态学、动物血浆和肺支气管组织中嗜酸性粒细胞(EOS)、淋巴细胞(LYM)计数、免疫球蛋白E(IgE)、细胞因子白介素4(IL一4)、干扰素Y(IFN—Y)含量、转录因子T-bet(T-boxexpressinTcell)及GATA-3(GATA

3、bindingprotein3)蛋白的表达水平，从量效、时效关系中评价天灸治疗哮喘的机理。方法：将70只SPF级SD雄性大鼠随机分为7组，分为正常组、安慰剂组、地塞米松组、大饼长程贴药组、大饼短程贴药组、小饼长程贴药组、小饼短程贴药组，每组10只。分别于实验开始第1天和第7天腹腔注射lmlOVA／AL(OH)。混悬液[含lOmgOVA和200mgAL(OH)。]致敏，第15天开始将大鼠放入自制雾化吸人箱内，用lOmg／LOVA生理盐水溶液雾化吸入激发，连续激发2周至大鼠出现呼吸急促、哮鸣音等多种症状。除正常组以生理盐水雾化

4、吸入以外，其余各组均以卵蛋白(OVA)致敏造模，造模成功后，将大鼠颈背去毛，对贴药组进行天灸治疗，其中大饼贴药组用lcmXlcm的药饼贴药，小饼贴药组用0．5cmX0．5cm的药饼贴药，具体穴位参照华兴邦n3等方法，动物饲养在气温36℃’37℃，湿度7596的类似三伏天气温的室内，将所制备药物按第1天(“上伏”)贴：定喘、肺俞、风门；第2天(“中伏”)贴：肺俞、厥阴俞、膏盲俞；第3天(“下伏”)贴：肺俞、脾俞、肾俞；第4天(“加强灸”)：肺俞、脾俞、肾俞；贴药后用医用胶布固定，每次贴药5h，每天1次，4次为一疗程，然后继续

5、常规饲养，休息3d后继续如上法治疗，依此类推，长疗程组共治疗3个疗程(12次)结束治疗，同法短程贴药组治疗1个疗程(4次)。安慰剂组以面粉调成糊状贴敷大鼠颈背，疗程同长程贴药组，地塞米松组予地塞米松0．5mg／(kg·d)进行腹腔注射，疗程同长程贴药组。所有动物都治疗完毕，末次治疗后再次用lOmg／LOVA生理盐水雾化吸入激发，观察所有动物的气道症状、体征并记录之。后将大鼠麻醉，抽腹主动脉血于EP管中待用。取肺组织，其中左肺用预冷PBS清洗冻存备用，用于RNA抽提。右肺中叶用于HE染色行病理切片，光学显微镜下找到完整的细支

6、气管横断面，采集图像，测量分析计算标准化总管壁厚度、标准化平滑肌厚度。称重右肺其余肺组织lOOmg置于匀浆容器中，冰浴匀浆，冻存备用。用血分析仪计数EOS、LYM，用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IgE、IL一4、IFN—Y含量，采用实时荧光定量(RT-qPCR)法检测转录因子GATA一3mRNA、T—betmRNA表达水平。结果：(1)大鼠的一般情况：正常组大鼠表现精神活泼，反应灵敏，呼吸平稳，毛色光洁，无任何一只出现呼吸急促、困难或喘鸣音。模型组大鼠在吸入OVA后不久即出现躁动不安，搔抓颜面皮毛等过敏症状，继而大鼠俯

7、伏不动，出现呼吸急促，腹式呼吸，伴紫绀，部分大鼠可闻及响亮的呼气相喘鸣音，口鼻流出粘液。反复激发后大鼠毛色失去光泽，精神不振和反应迟钝，地塞米松组在从开始用药即出现饮水增多、迅速消瘦、黑便等表现。(2)天灸对引喘大鼠症状的影响：与正常组比较，安慰剂组引喘潜伏期明显缩短，跌倒率、打喷嚏、鼻瘁抓鼻次数、点头运动的次数显著增加，差异具有统计学意义(P

8、程贴药组、地塞米松组引喘潜伏期明显延长，跌倒率、打喷嚏、鼻痒抓鼻次数、点头运动的次数明显下降，差异具有统计学意义(P<0．05)；同疗程药饼的大小对大鼠引喘潜伏期、跌倒率、打喷嚏、鼻痒抓鼻次数、点头运动的次数无显著性差异(P>0．05)；长程贴药组与地塞米松组比较，大鼠引喘潜伏期、跌倒率、打喷嚏、鼻痒抓