中药喘可治注射液对copd大鼠il--12stat4、il--4stat6信号通路影响研究

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1、广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名丝日期：纱／争年5月声口曰关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大

2、学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名煎论文导师签名日期口卯彩年r月夕日中文摘要IIIIIlUlIllLIIIIIlUIIIIIIY2622711研究目的：建立慢性阻塞性肺疾病大鼠模型，设置正常组、COPD大鼠模型组及喘可治注射液高、中、低剂量组，检测各组大鼠血清、肺泡灌洗液中细胞因子IFN．Y、IL．12、IL一12R、IL．4、IL-4R水平以及肺组织STAT4、STAT6蛋白、STAT4mRNA、STAT6mR

3、NA表达情况，探讨Thl／Th2分化失衡与COPD发病的联系；观察不同剂量喘可治注射液对细胞因子与STAT4／6蛋白、STAT4／6mRNA表达的影响及其相关性，探讨喘可治注射液通过干预IL．12／STAT4、IL一4／STAT6信号通路，调控Thl／Th2分化平衡而防治COPD的作用机制。研究方法：(1)本实验采用香烟烟熏加气管滴注脂多糖复合造模的方法建立慢性阻塞性肺疾病大鼠模型，从大鼠一般状态观察、肺组织肉眼观察、HE染色病理切片观察以及肺泡灌洗液细胞计数三个指标评价慢性阻塞性肺病大鼠模型以及喘可治注射液对慢性阻塞性肺病大鼠病理

4、改变和炎症细胞水平的影响；(2)采用酶联免疫吸附法对血清和肺泡灌洗液中的IFN．Y、IL．12、IL一12R、IL一4、IL．4R水平进行测定，通过比较分析补肾中药喘可治注射液对血清和BALF中各细胞因子的影响，探讨喘可治注射液对慢性阻塞性肺疾病大鼠的治疗作用；(3)用Westemblot蛋白质印迹法检测实验大鼠肺组织STAT4、STAT6蛋白表达，观察喘可治注射液对其表达的影响，从Thl／Th2分化调节角度评价补肾中药喘可治注射液的药效及其防治COPD的作用机制；(4)采用实时荧光定量PCR技术，对实验大鼠肺组织的STAT4mRN

5、A、STAT6mRNA表达水平进行测定，观察喘可治注射液对其表达的影响，拟从调节Thl／Th2免疫失衡角度评价补肾中药喘可治注射液防治COPD的疗效及作用机理。研究结果：(1)成功复制出COPD大鼠模型，通过大鼠一般状态观察、肺组织肉眼观察、HE染色病理改变观察和肺泡灌洗液白细胞总数与分类计数结果分析，该模型病理形态学与人类COPD改变基本一致；其中与人类相似的症状表现如咳嗽、气喘、呼吸急促等，与COPD临床症状要点基本符合，且模型大鼠呼吸浅急，喘息急促，弓背滞伏蜷卧，喜扎堆，行动迟缓，神情倦怠等亦符合中医肾虚证见证；喘可治注射液有

6、改善COPD大鼠咳喘、口鼻分泌物等临床症状的作用，大鼠毛色光泽、动作、精神状、饮食摄水、口鼻分泌物等情况均较模型组有明显好转；可显著改善COPD大鼠肺组织病理损害，大鼠两肺体积、表面光滑度及弹性、肺大泡情况较模型大鼠明显好转，病理观察大鼠杯状细胞明显少见、炎症细胞浸润明显减轻、支气管管壁无明显增厚，肺泡相对完整，与模型组相比明显减轻；(2)研究发现COPD模型组的总白细胞计数值最高，喘可治注射液高、中、低剂量组与正常组比较均无显著性差异(Pl>O．05)，说明喘可治注射液对COPD大鼠炎症细胞有明显的抑制效果；在细胞分类计数中，各组

7、均以单核巨噬细胞为主，与正常组比较，模型组单核巨噬细胞百分比显著降低(尸<0．01)，而淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞百分比均显著增加(尸

8、分比，降低淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞百分比，对COPD大鼠炎症细胞分泌具有明显的抑制作用；不同剂量喘可治注射液对实验大鼠炎症细胞的影响具有明显的量效关系。高、中剂量喘可治对白细胞分泌的抑制作用，对单核巨噬细胞的促进分泌、对淋巴