基于its-1弓形虫基因的环介导等温扩增(lamp)检测技术的研究及应用

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1、分类号：S8551坌±窆密级：尘珏中文论文题目：单位代码：10335学号：21112Q5垒洳≥：J～嗜硕士学位论文⑧英文论文题目：Besear尘anda卫卫ucationofloo卫．mediated兰啦巨!垒墨丝垡星2丝星墼g曼坠金耋萋耋蚕蓁謇茎圣至章至至霉rL鍪薹薹冀C蓁零茎童宴固≥i雾三蓁萋雾薹薹季主羹蓁霎蓁蘸薹霎囊薹雾薹蓁羹雾霎羹圣霎季萋蓁雾蓁蓁雾羹蓁蚕蓁；雾塑薹蒌(CSFVlE2鎏耋羹蓁!蓁蓁霎季耋蕊雾!薹蓁薹圣蓁，霎薹茎霉差霎室垂霎妻薹蚕冀薹薹茎蓁霎蓁薹；薹蓁蓁萋蓬耋蓁雾蓁藿CSFV1茎蓁萋霪囊。妻薹霎篓萋耋雾妻攀童零≥≥孝A／D

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3、DissertationSubIllittedinp眦ial如lnllmentofrequirementsforthede伊eeofMasterofV-et耐na巧inA鲥cultureC01legeofAnimalSciencesZhejiangUniVersityHangzhou，P．R．ChinaJan，2014浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江大学或其他教育机构的学

4、位或证书而使用过的材料．与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：李。害武签字日期：砷／中年弓月≥7日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江大学有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)导师签名：妒鹤签字日期：即，V年弓月力日、叭刁、筐月书饧一弓各摔麟帆利沙作：、又期沦卧，位字课

5、题来源浙江省重大科技专项重点农业项目(No．2012c12009．2)浙江省金华市科技计划重点项目(No．2010．2．068)浙江大学摘要硕士学位论文摘要弓形虫是一种呈世界性分布的机会性致病原虫，可以寄生于包括人在内的几乎所有温血动物的有核细胞内。由其引起的弓形虫病，对动物以及人类危害较严重。免疫系统正常的人感染弓形虫病后，呈隐性感染状态，通常不会呈现明显的临床症状；免疫力低下的人群(如艾滋病患者、骨髓移植和器官移植病人等)感染该病后，会产生严重的病变，甚至会引起死亡。妊娠期母畜感染该病，常可引起流产、死胎、以及胎儿眼部、大脑和中枢神经损伤

6、，会对畜牧业造成重大的经济损失。目前针对弓形虫的检测技术，存在着操作复杂、敏感性低，假阳性率高，需要昂贵的仪器设备等缺点，而基层单位迫切需要一种既有良好的特异性和敏感性，又简便实用的检测方法。环介导等温扩增技术(圳P)具有操作简便、反应迅速、灵敏性和特异性高等优点，能满足目前的这种迫切需求。本研究基于弓形虫Im株的核糖体DNA内转录间隔区基因1(ITS．1)序列，设计特异性引物，建立了针对弓形虫的普通PcR检测方法。该普通PCR检测体系特异性强，不能在犬新孢子虫、棘球蚴、旋毛虫、李斯特杆菌、猪链球菌基因组DNA中扩增出条带；敏感性高，该方法可

7、检测到的弓形虫DNA最低量为90f∥“L。同时基于弓形虫Im株的ITs．1基因序列，设计6条特异性识别靶序列上8个区域的引物，经过L脚扩增和体系优化，建立检测弓形虫的I，AⅧ方法。该I．AⅧ方法在65℃恒温条件下，经过30min扩增即可完成反应。特异性试验结果显示，该方法与犬新孢子虫、棘球蚴、旋毛虫、李斯特杆菌、猪链球菌等病原体的基因组DNA不会发生交叉反应。敏感性试验结果表明，其最低能检测到的弓形虫DNA量为o．9f∥皿，与前面建立的普通PcR检测方法相比，该L脚检测方法的敏感性要高100倍。该检测体系的成功建立为兽医基层单位提供弓形虫病的

8、临床诊断和流行病学调查的技术支持。为了解浙江省杭州、金华地区猪中弓形虫病的流行现状，更好地为弓形虫病的防治及猪肉食品卫生安全的保障提供科学的依据，我们从浙江省杭州、