久效磷农药对斑马鱼(danio rerio)肾间应激轴的影响研究

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1、万方数据久效磷农药对斑马鱼(Daniorerio)肾间应激轴的影响研究学位论文答辩日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：万方数据谨以此论文献给所有关心、支持和帮助过我的人⋯⋯⋯一⋯．钟艳万方数据独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得(2或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：肼身砂签字日期：刎牛年厂月；。日学位论文版权使用授权

2、书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事项：1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：铆暑幻导师签字：签字日期：沙H年f月弓。日签字日期：弘吁年f月如日万方数据久效

3、磷农药对斑马鱼(Daniorerio)肾间应激轴的影响研究摘要有机磷类杀虫齐U(organophosphorusinsecticides，OPI)包括久效磷、高灭磷己被证实能够干扰哺乳动物下丘脑-垂体-肾上腺轴(hypothalamic．pituitary-adrenalaxis，HPA轴)功能，影响血浆皮质醇／皮质酮水平并引起高血糖症。HPA轴是三大内分泌轴线之一，其主要功能是调节动物的适应性应激反应，HPA轴受到干扰可能会直接影响动物的应激反应能力。然而，有关OPI对脊椎动物尤其是鱼类应激功能影响的研究比较少见。目前己知大多脊椎动物的应激应答都具有雌雄特异性即性二态

4、性，因此，本文采用有机磷农药——久效磷分别暴露雌雄斑马鱼，暴露结束后给予二次胁迫(空气暴露)，以应激激素皮质醇(肾间应激轴的终端激素)为指标检测久效磷农药是否能够影响斑马鱼的应激功能并干扰其二次应激，雌雄斑马鱼在空气暴露胁迫下的皮质醇应激应答是否具有性二态性；其次在下丘脑、垂体、肾间腺各个水平上检测下丘脑．垂体．肾间腺轴(hypothalamic．pituitary-interrenalaxis，HPI轴)相关调控因子的基因表达水平，探讨久效磷农药干扰斑马鱼皮质醇应激应答的作用机制；最后在肝脏(皮质醇作用的下游靶组织之一)水平上，进一步探究久效磷农药是否影响肝脏组织对皮

5、质醇的应答性。本文研究结果表明：(1)1¨∥l、10}tg／1和100lxg／1久效磷农药暴露雌雄斑马鱼21d后，给予二次急性胁迫(空气暴露处理)，采用同位素放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)检测了斑马鱼整体皮质醇含量，结果表明：雌性斑马鱼整体皮质醇含量随暴露浓度的增加呈逐渐下降的趋势，其中100I．tg／1久效磷农药暴露雌鱼组的整体皮质醇含量显著降低，而久效磷农药暴露对雄性斑马鱼整体皮质醇水平均没有显著性影响。因此，我们认为100H∥l久效磷农药亚慢性暴露能够显著抑制雌性斑马鱼的皮质醇应答，雌性斑马鱼对久效磷农药的暴露可能更加敏感。此外，在空气

6、暴露胁迫下，对照组雌雄斑马鱼皮质醇水平均无差异，表明雌雄斑马鱼的皮质醇应激应答无性二态性。(2)1p∥l、10“∥l和100p．g／1久效磷农药分别暴露雌雄斑马鱼21d后，给予二次急性胁迫(空气暴露处理)，采用了实时定量PCR(real—timePCR)检测了雌雄万方数据久效磷农药对斑马鱼(Daniorerio)肾间应激轴的影响研究斑马鱼下丘脑促肾上腺激素释放因子(CRF)、糖皮质激素受体(GR)mRNA表达水平，垂体促肾上腺激素前体(POMC)mRNA水平，肾间腺皮质醇合成相关因子黑皮素2型受体(MC2R)、类固醇激素合成急性调节蛋白(STAR)和11∥．羟化酶(P4

7、50㈨)，以及皮质醇代谢相关酶11∥．羟类固醇脱氢酶(1lfl-HSD2)和20p-羟类固醇脱氢酶(20fl-HSD2)的mRNA表达水平。结果发现：100“∥l久效磷农药暴露雌鱼组垂体POMC、肾间腺MC2RmRNA水平显著降低，皮质醇的合成可能受到抑制；雌鱼肾间腺2叩一HSD2mRNA表达水平极显著升高，从而进一步促进了皮质醇的代谢；下丘脑GRmRNA水平极显著降低，皮质醇负反馈途径受到干扰；本研究表明久效磷农药可能在下丘脑．垂体．肾间腺轴多水平上发挥了干扰效应，最终导致雌性斑马鱼整体皮质醇水平降低，应激能力减弱。100肛∥1久效磷农