围产蒙古牛外周血中性粒细胞凋亡调控基因表达研究

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1、本研究由国家自然科学基金：(30960293、31260626)资助ThestudywassubsidizedbytheNaturalScienceFoundationofChina(30960293，31260626)摘要目的：通过探讨围产蒙古牛外周血中性粒细胞p53，Bax，eyt．C，caspase．3和Bcl．2基因表达，为揭示和评价围产免疫抑制提供理论依据。方法：试验选用经产蒙古牛(2～3胎次)10头，同期发情、配种，从中选取合适受孕牛3头(I、II和III)，于分娩前22，18，14，10，8，6，4和2天(-22d，．18d，．1

2、4d，．10d，．8d，．6d，．4d，．2d)，生产当天(0d)，产后2，4，6，8，10，14天(2d、4d、6d、8d、10d、14d)颈静脉采血。采用全自动动物血液分析仪检测外周血主要白细胞数量；分离血清，放射免疫法检测血清中雌二醇、孕酮及糖皮质激素浓度；分离中性粒细胞，RT．PCR和WestemBlot检测中性粒细胞p53，Bax，cyt-c'caspase．3和Bcl．2基因mRNA与蛋白表达。结果：1．外周血白细胞总数、PMNs和MC总数的变化趋势是从．22d逐渐升高，．10d升至最高，Od时显著下降(P<0．05)，2d时迅速升

3、高(P<0．05)，2～14d维持在正常水平；淋巴细胞．22～．8d变化不明显，．8"-一0d逐渐下降，0d降至最低，2d时显著升高(P<0．05)，2414d维持在正常水平；嗜酸细胞．22--一．10d逐渐升高，．10d达到峰值，随后下降，在．6、．2d有所回升，0d最低，产后逐渐增加。2．各受试牛E2从．22d逐渐升高，．2d升至最高，2d时显著下降(P

4、d维持在基础浓度。ERamRNA丰度从．22d逐渐升高，．8d升至最高，．8～14d逐渐下降，而ER8无明显变化。3．p53，Bax，cyt．C和caspase．3mRNA丰度从．22d逐渐下降，Od降至最低，0～14d逐渐升高：抗凋亡基因Bcl．2mRNA丰度从．22d逐渐上升，0d升至最高，0～14d逐渐降低：凋亡相关蛋白表达与mRNA基本一致。结论：围产蒙古牛外周血主要类固醇类激素(GC、P4和E2)水平的动态变化模式与PMNs凋亡基因(p53，Bax，cyt-C，caspase-3和Bcl一2)表达上／下调的规律性变化密切相关，并且E2

5、-ERa途径可能在凋亡基因表达的信号调控中发挥重要作用。关键词：围产期；蒙古牛；中性粒细胞：类固醇激素；凋亡基因StudyontheExpressionofApoptotic—regulatedGenesofPeripheralBloodNeutrophilsinPerinatalMongoliaCattleAbstractPurpose：Toprovidetheoreticalevidenceforrevealingandevaluatingperinatalimmunosuppressionbyexploringtheexpressiono

6、fp53，Bax，cyt-c，caspase-3andBci-2genesonperipheralbloodneutrophilsinperinatalmongoliacattle．Methods：ThreemongoliacattleⅡ，IIandIIllwereselectedfromtenmultiparousones(parity2-3)treatedbyestroussynchromzation，hybridizationandbreededintheSalTleconditionsinthisstudy，andperipheralv

7、enousbloodWaScollectedon22，18，14，lO，8，6，4and2dofpropartum(-22d，．18d，．14d，-10d，．8d，．6d，．4dand一2d)，thedayofparturition(0d)，and2，4，6，8，10and14d(2d，4d，6d，8d，lOdand14d)ofpostpartum．ThelevelsofE2，P4and(；CwasmeasuredbvR【Ainserum．Theamountofwhitebloodcells，theexpressionofPMNp53，Bax，

8、cyt．c，caspase．3andBcl-2genesmRNAandproteinsweredetectedbv血11．automaticanima