选修实验：细菌培养技术

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1、实验三：学习细菌培养的基本技术实验原理：①要根据微生物的营养需要，采用相应的配方配制培养基。②培养基除满足微生物所需各种营养外，还要适宜的pH值。本实验所用的牛肉膏蛋白胨培养基应用广泛，适于多种细菌的培养。④配置好的培养基必须经过灭菌，一般采用高压蒸汽灭菌。在整个细菌接种培养过程中，一般要求无菌操作。棉塞能防止杂菌污染,保证通气良好方法步骤：一、培养基的配制称量è溶化è调pH值è培养基的分装è加棉塞è包扎加水加热边滴边搅拌趁热分装棉塞长度2/3在内外加牛皮纸随时用测pH值培养基高度为1/5挂上标签二、灭菌高压蒸汽灭菌的效果是细菌培养的关键。灭菌原理:依据高压升温使菌体细胞蛋白质凝固

2、变性失去生命力,将0.11MPa、121oC,维持30min彻底灭菌操作：加水、装料è加热、排气è升压、保压è降压、排气加开水适当,试管打开排气阀,加热至沸腾压力至0.11MPa,T为121oC压力降至0,口向上,不能太挤排气5～10min,关闭控制热源，保压30minT<100oC开阀三、搁置斜面当T接近50oC，将试管摆在一根木棒上。培养基形成的斜面不超过试管总长度的一半。四、接种微生物接种的各项操作要求必须在无菌条件下进行。①设备的准备和消毒：设备：无菌操作箱(无条件可直接在在酒精灯上)，接种环双手75％酒精消毒熏蒸法或紫外灯灭菌灼烧法消毒②采菌：点燃酒精灯è用左手并排拿起有

3、菌种的试管和培养试管è靠近酒精灯火焰,旋松棉塞è右手拿接种环,在火焰上烧红灭菌è取下棉塞，并灼烧试管口一周è接种环伸入试管，挑去少量菌体，立即抽出③接种：迅速将接种环插入培养试管中è在斜面上由管底向管口连续轻划几道蛇形曲线（画线要求：线要划密一些,不要划破培养基,不要使接种环接触到管壁或管口,不重复划）è及时抽出接种环è将试管口在火焰上灼烧，塞上棉塞è熄灭酒精灯,菌种加热倒掉五、保温培养接种后，试管放在保温箱中，25oC下培养5～7天(37oC下培养24h)练习：一、选择题1、下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是（）A、防止杂菌污染B、消灭杂菌C、培养基和发酵设备都必须灭菌D、灭菌

4、必须在接种前2、制作细菌培养基时，pH值应调为（）A、4.5～6B、7.4～7.6C、7.8～8D、2～43、下面的资料表明在各种培养基中细菌的生长（S、C、M为简单培养基，U、V、X、Y、Z代表加入培养基的不同物质），问哪一些物质细菌不能合成（）培养基S、C、MS、C、M+V+ZS、C、M+U+YS、C、M+Z+XS、C、M+V+YS、C、M+U+XS、C、M+Y+Z生长状况－－＋－＋－＋A、UB、VC、YD、Z4、细菌培养基常在121oC压力锅中灭菌，如果只是在100oC的温度下降细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活（）A、大肠杆菌B、一种青霉C、枯草芽孢杆菌D、沙门氏菌5、

5、下列操作与灭菌无关的是（）A、接种前用火焰灼烧接种环B、接种前用酒精擦拭双手C、培养基在50oC时搁置斜面D、接种在酒精灯的火焰旁完成6、培养基分装完毕以后，在管口上加一棉塞，下图中哪种加棉塞的操作是正确的（）7、在用高压蒸汽锅灭菌时，其灭菌的正常压力为（）A、49KPaB、98KPaC、9800KPaD、9.8KPa8、高温灭菌的原理是（）A、每种微生物生长的最适温度是一定的B、微生物对于高温环境部适应C、高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动D、高温降低了环境中氧的浓度9、在培养基的配制过程中，下列哪项操作是不正确的（）A、趁热降培养基分装到洁净的试管中，培养基高度为试

6、管长度的1/5B、在溶化过程的最后要补加蒸馏水至100mLC、在调pH值时要随时用pH试纸测pHD、试管加塞后，每10支用绳扎捆，在试管外挂上标签，注明培养基名称、配制日期和制作者姓名，就可以进行灭菌10、在斜面培养基上接种时，其正确的操作顺序是（）①用左手大拇指、食指和无名指夹住菌种试管和待接种的斜面试管，管口并齐，使斜面向上成水平状态②右手拧送棉塞，但不取下③在火焰边用右手无名指和小指夹两个棉塞，将它们取下，同时左腕转动，烧灼管口一周。④将接种环伸入管内，让环先接触培养基上未长菌的部位，使环冷却，然后轻轻挑取少量菌体，立即将接种环抽出。⑤右手拿接种环，在火焰上灼烧灭菌。⑥在火焰

7、旁迅速将沾有菌体的接种环伸到培养基的底部，由里向外轻轻画蛇形细线。⑦抽出接种环，再用火焰烧灼管口，并在火焰上方将棉塞塞上。A、①②③④⑤⑥⑦B、①②⑤③④⑥⑦C、①③②④⑤⑥⑦D、②③①④⑤⑥⑦11、下列有关碳源的叙述不正确的是（）A、碳源主要用于构成微生物的细胞物质和一些代谢产物B、某些碳源可以作为微生物的主要能源物质C、蛋白质一定不能做碳源D、不同种类的微生物的碳源可能不同12、细菌数目上升的最快时期和活菌数目的高峰期分别是（）A、对数期、稳定期B、稳定期、稳定期