[实验三] 学习细菌培养的基本技术.doc

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1、［实验三］学习细菌培养的基本技术教学目标1.知识方面(1)通过本实验使学生了解微生物实验中无菌操作的方法及重要性；学习细菌培养的基础知识；加深对微生物的营养、代谢和影响生长的环境因索等知识的理解。(2)掌握培养基的制备、消毒灭菌及接种培养等基本操作方法，理解其原理。2.态度观念方面培养严谨、求实的科学态度；树立勤俭节约、爱护公物、相互协作的优良作风及安全意识；提高学生的科学素质。3.能力方面(1)培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力。(2)通过分组实验，统筹分配，培养学生动手操作能力和创新、应变能力。重点、难点分析重点是了解微生物实验的一

2、些最基本操作技术及其原理。难点是根据本校条件如何保证实验的有序、有效地进行。教学模式以课堂实验为主，课内外想相结合的教学，属于半独立性质及独立性质的实验。教学手段学生分组实验、录像、投影仪。课时安排大纲要求4课时。针对高三年级的特点，建议老师们利用机动课时，最好安排连堂的两节课完成此实验。设计思路教学过程一、课前准备。1.实验室做好卫生，物品摆放有序，悬挂“微生物实验须知”。在每次实验前，实验台、地面用3%的来苏水（或石碳酸）消毒，有条件的提前用紫外灯照射半小时。接种箱在使用前用紫外灯照射半小时和熏蒸法半小时（高猛酸钾+甲醛）消毒。在消毒过程中要

3、严格监管,注意安全,尤其是紫外线对眼结膜及视神经有损伤作用，对皮肤有刺激作用，所以不能直视紫外线，照射期间，室内不能有人或其他动物、植物。2.实验材料⑴菌种选择：菌种选择的原则是安全无毒、容易获得。教材中所提供的金黄色葡萄球菌和芽抱杆菌中的大部分是有毒的，不宜采用。经反复筛选，我们选择了枯草芽抱杆菌（BacillusSubtilis）o制备和保存：可以向各级菌种站、大专院校索取或购买。若五条件，也可以自己分离培养，方法如下：取田园土10g加蒸憎水90mL制成土壤悬液，可再制成10-3>10—2、10-1各种稀释的土壤溶液，用涂布法在牛肉膏蛋白月东

4、平板上培养，温度32°Co培养38—48h后（适于芽抱生长）选择菌落乳白色，大小适中的镜检，可用结晶紫染色。镜下菌体呈杆状，芽孑包位于菌体中间或靠尖端.大小与菌体相当的即为所需菌种——枯草芽抱杆菌。无菌操作条件下将菌种转接到斜面培养基上，扩大培养，按实验班实际分组数，平均两组一支的数量进行准备。如需保存一段时间，可待菌体充分生长后，将棉塞部分用油纸包扎好，置于冰箱内冷藏保存（4°C—*6°C）,最好每月移种一次。（2）药品按课本要求准备，可从化学试剂或药品公司购买。如五条件，牛肉膏也可自制，方法如下（以配制1000mL培养基为例）：瘦牛肉（去筋去

5、油）500g,切成小丁，加入1OOOmL蒸馄水，煮熟（牛肉熟、凝集成块）过滤，补充蒸馄水至1OOOmLo如果实验室为学生配制，可直接从市场购买“营养琼脂”按说明调配。1.实验用具（1）接种工具可将电炉丝拉直，缠绕在玻璃棒或金属棒上制成；也可制成一次性接种针，用中号毛衣针从中间截断为二，打磨尖端使其不尖锐，以报纸扎好，注意大小头，每包10-12支，与培养基一起高压蒸汽灭菌。这种接种工具的优点，首先是操作简单，不用灼烧灭菌；其次是容易控制，操作起来灵活方便，在接种划线时不会划破培养基；它也适用于有超净工作台的实验室(因为工作台抽风的过程常使酒精灯火焰

6、不稳定)。此外，这种接种工具经济易得，灭菌后还可反复使用。(2)灭菌设备首选高压灭菌锅。当实验室没有此设备时，可选择使用大的蒸笼,在这种情况下，蒸汽的压力不超过大气压，温度不超过100°C。我们采用常压间歇灭菌法，即把培养基或其他灭菌物放在蒸笼内，每天蒸煮一次，每次30min,连续蒸煮3d。在每两次蒸煮之间，将培养基或灭菌物放在28〜30°C的条件下培养24h,芽抱萌发成为营养体，在第二次蒸煮时乂可被杀死，极少数在第一次培养中就形成的芽他在第二次培养时萌发为营养体，在第三次蒸煮时也被杀死。经过三次蒸煮,培养两次，基本上达到完全灭菌。(3)培养设备

7、首选恒温箱。经实验，对于枯草芽抱杆菌，发育良好的温度为3212培养24-48ho若没有恒温箱也可室内培养，若室内温度稍低，贝IJ应延长培养时间。1.组成实验筹备小组为保证实验的顺利进行，可在课前组成实验筹备小组(可以自愿报名或由1〜2个实验小组组成)。这样一方面是让学生了解课前的准备工作，理解微生物实验的具体耍求和特殊性，对其他学生有指导作用；另一方面，通过小组的课前实际操作，便于掌握整个实验不同步骤所需的大约吋间；同吋，也可为上课准备材料。（1）制备斜面培养基（供接种用）。（2）实验环境和人体表面微生物的检查（见下表）。实验器材操作方法样品来源

8、培养条件实验结果牛肉膏蛋白腺琼脂平板酒精灯接种针严格无菌操作方法空气实验台手头发口腔（咳嗽）37°C,24—48小时菌落计数，菌落类型描