细菌培养技术

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1、第二节细菌培养检测技术　　节概述　细菌的培养技术是微生物实验中基本技术之一。大多数细菌均可用人工方法培养，只有将细菌培养出来才能对它进行研究和鉴定　　知识点导航　　一.培养基的种类　　培养基（culturemedium）是细菌生长繁殖所需要的各种营养物质的人工制品。适宜的培养基能使细菌在体外迅速生长繁殖，便于对细菌进行分离和鉴别。可分为基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧菌用培养基和特殊培养基。　　（一）基础培养基　　只含有细菌生长所需的最基本营养成分，应用最广泛，为制备多种培养基的基础

2、，常见的有肉汤培养基、琼脂培养基。　　（二）营养培养基　　在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有机物，可供营养要求较高的细菌生长需要或增菌用。如结核分枝杆菌培养基中添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。　　（三）选择培养基　　利用不同种类细菌对化学物质的敏感性不同而制成，使分离菌大量繁殖而抑制其它细菌生长的培养基。培养基中含有的抑制剂能抑制非目的菌生长或使其生长不佳，有利于目的菌的检出和识别。选择培养基多为固体平板，用于从标本中分离某些特定的细菌。　　（四）鉴别培养基　　培养基中加有某些特定成分，

3、如糖、醇类和指示剂等，用于检查细菌的各种生化反应，以资鉴别和鉴定细菌。　　（五）厌氧菌用培养基　　专性厌氧菌须在无氧条件下才能生长，故需在培养基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸钠等还原剂，降低培养基中氧化还原电势，并应与外界空气隔绝，使培养基本身为无氧的环境。　　（六）特殊培养基　　为某些需要在特殊条件下才能生长的细菌培养之用。如高渗盐增菌培养基、高渗糖增菌培养基、改良Kagan氏培养基等。　　二.培养基的制备　　制备一般培养基的主要过程基本相似，包括调配、溶化、调整pH、过滤、分装、灭菌及检定和保存。　　三.

4、细菌检验室的注意事项及无菌技术　　细菌培养必须随时为防止污染和病原菌的扩散而进行操作，即无菌操作。细菌检验室的注意事项如下：　　1．细菌的培养应在接种罩或无菌室内进行。有条件的实验室可在超净工作台内进行。　　2．用接种环分离和移种细菌时，用前用后均需灭菌处理。一般采用火焰灭菌法。　　3．从培养瓶或试管培养物中取标本或移种时，在打开瓶口、管口或关闭前，均要在火焰上通过2～3次。切不可将含菌材料污染台面和其他物体。　　4．如不慎将试管等打破造成菌液污染时，不要惊慌，应立即报告负责人，然后用3％来苏或5％石炭

5、酸处理污染台面或地面，至少浸泡30分种。　　5．工作完毕后，用紫外光灯照射30分钟，或用3％来苏擦拭台面，并清洗双手。　　四、接种环和接种针使用　　接种环和接种针由三部分组成，即环（针）部分、金属柄部分和绝热柄部分。接种环和接种针通常选用电热（镍）丝，环的直径随使用目的而不同，一般多为2～4mm，环和针的长度为40～50mm。　　接种环（针）使用前后均应进行灭菌处理，将接种环（针）末端直立火焰中，烧红镍丝部分，再使接种环（针）金属柄旋转通过火焰3次灭菌，冷却后用以取菌或待试标本。使用接种环（针）完毕后立

6、即将染菌的镍丝部分于还原焰（内焰）中加热，烤干环（针）端附着的细菌或标本，以免环（针）上残余的细菌或标本因突受高热，爆烈四溅，而污染环境和导致传染危险。然后再移于氧化焰（外焰）中烧红灭菌，最后将金属柄部分往复在火焰中通过3次。用完后的接种环（针），应立即搁置于架上，切勿随手弃置，以免灼焦台面或其他物件。　　五、接种操作区　　为避免在接种过程中污染环境以及空气中的细菌污染培养物，接种均应在接种罩或无菌室内进行，此外细菌学实验室所必需的设备还包括无菌工作台、生物安全柜和生物安全实验室。　　（一）接种罩　接种

7、罩的式样很多，可用木框和玻璃制成，亦有用有机玻璃制成。接种罩在用前先以3％石炭酸或来苏轻拭，内需装有紫外线杀菌灯，用前可先行照射，以保证罩内无尘埃和细菌。操作结束后，应立即清理内部，并作罩内消毒处理。　　（二）无菌工作台　又称超净工作台（supercleanbench），目前多采用垂直层流的气流形式。通过变速离心风机将负压箱内经过预滤器过滤的空气压入静压箱，再经高效过滤器进行二级过滤，从出风面吹出的洁净气流，以一定的和均匀的断面风速通过工作区时，将尘埃颗粒和微生物颗粒带走，从而形成无尘无菌的工作环境。使

8、用时应提前50分钟打开紫外线杀菌灯，30分钟后关闭并启动送风机。净化区内严禁存放不必要的物件，以保持洁净气流型不受干扰。　　（三）无菌室　无菌室又称洁净室（cleanroom），是在实验室内部安装的用于无菌操作的小室。室内应有空气过滤装置、紫外线杀菌灯等。　　（四）生物安全柜（biologicalsafetycabinet，BSC）目前微生物试验中多采用生物安全柜，是为操作原代培养物、菌（毒）株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保