细菌的分离培养技术

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1、细菌的分离培养技术一、常用培养基的制备（一）肉膏汤培养基(brothmedium)1、成分牛肉浸膏3～5g蛋白胨10g氯化钠5g蒸馏水1000ml2、制法(1)于1000ml蒸馏水中加入上述成份，混合加热溶解。(2)调整pH为7.4～7.6，煮沸3～5min，用滤纸过滤。(3)分装于适当容器内，高压灭菌103.43Kpa20min,置阴暗处或冰箱中贮存备用。3、用途供一般细菌培养之用，亦可制备糖发酵管及琼脂培养基用。（二）肉浸汤培养基(infusionmedium)1、成分⑴新鲜牛肉(去脂绞碎)500g蛋白胨10g⑵氯化钠5g蒸馏水1000ml2、制法(1)取新鲜牛肉(兔肉)除去肌键

2、、肌膜及脂肪，切成小块后用绞肉机绞碎或用刀剁碎，置于糖瓷或铝制锅中，每500g碎肉加水1000ml混合后置冰箱中过夜。(2)次日取出肉浸液，搅拌均匀，煮沸30min并常搅拌以免沉淀烧焦。如蛋白质已凝固，即停止加温，补足失去水分。(3)用纱布或绒布挤压过滤，使所有肉汁尽量挤出，再用脱脂棉滤入大三角烧瓶内。(4)在滤液中加入蛋白胨(10g/L)、氯化钠(5g/L)，再加热使其全部溶解。(5)调整pH至7.6～7.8，煮沸10min，以滤纸过滤。(6)分装三角烧瓶，塞好棉塞，再用厚纸将瓶口扎好，高压灭菌103.43KPa20min，冷却后置阴暗或冰箱中保存备用。3、用途供作基础培养基用，营

3、养较肉膏汤好。一般营养要求不高的细菌均能生长。（三）普通琼脂培养基(agarmedium)1、成分牛肉浸膏3～5g蛋白胨10g氯化钠5g琼脂20～25g蒸馏水1000ml2、制法⑴将上述成分置于三角烧瓶中，煮沸使其溶解(须防止外溢)，并补足由于蒸发失去的水分。⑵趁热调整pH至7.6，以绒布过滤，分装试管或烧瓶内，高压灭菌103.43KPa15min。⑶琼脂斜面培养基制法：高压灭菌后，趁琼脂尚未凝固前，将其分装在已灭菌的试管内，斜放在台面上，待凝固后即成琼脂斜面培养基。琼脂平板培养基制法：经高压灭菌后的培养基冷却至50～55℃时，打开瓶口棉塞，将琼脂倒入已灭菌的平皿内(直径9cm的平皿

4、约需培养基20ml)，待凝固后即成琼脂平板培养基。平板培养基制成后，通常都是倒置的，这种放置既便于取放，又有利于避免水分蒸发，以及保持无菌状态。普通琼指培养基亦可用市售的营养琼脂粉制备。取4.5g营养琼脂粉加蒸馏水100ml，高压蒸汽灭菌后倾注平皿即成。3、用途供一般细菌培养用，并可作无糖培养基。（四）半固体琼脂培养基(softagarmedium)1、成分⑴牛肉浸液(或牛肉膏汤)100ml⑵琼脂0.25～0.5g2、制法⑴将琼脂加于肉浸液中，加热溶化。⑵以绒布过滤并分装试管，每管约1～1.5ml。⑶高压灭菌103.43KPa20min后，直立放置，待凝固后即成高层培养基，保存备用。

5、3、用途保存一般菌种用，并可观察细菌的动力。（五）血液琼脂培养基(bloodagarmedium)1、配方一：⑴成分：①普通琼脂培养基100ml②脱纤维羊血(兔血)8～10ml⑵制法①将高压灭菌后的普通琼脂培养基(pH7.6)加热融化。②冷至50℃左右，以无菌操作加入无菌脱纤维羊血(临用前置37℃水箱中预温30min)8～10ml，轻轻摇匀(防止产生气泡)，倾注于灭菌平皿内或分装试管内，制成血琼脂平板或血琼脂斜面培养基。③待凝固后，抽样于37℃培养18～24h行无菌试验，若培养基上无细菌生长即可使用或保存于4℃冰箱内备用。⑶用途供分离营养要求较高的病原菌用。2、配方二：⑴成分牛肉膏(

6、pH7.8)800ml硫酸镁(493g/L)8ml脱纤维羊血80ml琼脂21～23g5g/L对氨基苯甲酸8ml⑵制法①将肉膏汤置于三角烧瓶内，加入硫酸镁、对氨基苯甲酸及琼脂，混合并使液体浸湿琼脂。②加热溶解，或置于103.43kPa高压灭菌器内30min(可达融化与灭菌的目的)。③取出后冷至50℃左右，以无菌操作加入无菌脱纤维羊血或兔血，轻轻摇匀，倾注平板，凝固后，抽样经37℃培养18～24h，如无细菌生长，冷藏备用。⑶用途：供已使用过抗生素及磺胺药的病人标本分离培养。（六）SS琼脂培养基(Salmonella-Shigellamedium)1、成分这是一种选择性培养基，SS琼脂培养

7、基配方较多，其基本原理一致。2、制法⑴将牛肉膏、蛋白胨和琼脂加入水中，加热溶解。⑵加入胆盐、乳糖、柠檬酸钠及柠檬酸铁，微微加热，使之全部溶解。⑶调整pH至7.2后，用绒布或脱脂棉过滤。⑷加入煌绿和中性红水溶液，再煮沸一次(无需高压灭菌)，待冷至55℃左右倾注平板，凝固后将平板置37℃温箱中干燥30min后应用或冰箱保存备用。3、用途供分离培养肠道致病菌用。（七）吕氏血清斜面培养基(Loefflermedium)1、成分⑴10g/L葡萄糖肉浸液100ml⑵动