低密度脂蛋白受体相关蛋白2在阿尔茨海默病发病机制中作用的实验研究

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1、上海交通大学医学院博士学位论文上海交通大学医学院2011级博士研究生学位论文低密度脂蛋白受体相关蛋白2在阿尔茨海默病发病机制中作用的实验研究ExperimentalStudyoftheroleofLow-densityLipoproteinReceptor-relatedProtein2inthepathogenesisofAlzheimer’sDisease培养单位：上海交通大学医学院附属瑞金医院研究生：王丽玲学号：0117209078指导教师：陈生弟教授学科专业：神经病学答辩日期：2014年

2、5月9日研究方向：神经退行性疾病的发病机制申请学位：医学博士（科学学位）基金资助：国家自然科学基金面上项目(项目编号：81171027)上海交通大学医学院“博士创新基金”（项目编号：BXJ2013053）万方数据上海交通大学医学院博士学位论文上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式

3、标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日万方数据上海交通大学医学院博士学位论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”

4、）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日万方数据上海交通大学医学院博士学位论文低密度脂蛋白受体相关蛋白2在阿尔茨海默病发病机制中作用的实验研究摘要阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease，AD）的发病被认为与遗传、年龄和环境因素密切相关。近年来关于低密度脂蛋白受体相关蛋白（Low-densitylipoproteinreceptor-relatedprotein,LDLR）及其所介导的胞内信号系统在AD发病中的作用日益成为关注的焦点。病理学研究发现，该家族成员之一的低

5、密度脂蛋白受体相关蛋白2（LRP2,megalin)在脉络膜丛中的表达及其功能随年龄增长而逐渐降低，遗传学研究更进一步发现LRP2基因突变可导致一些神经变性疾病（如Donnai-Barrow综合征）的发生。因此，LRP2是否也在AD发病机制发挥了作用值得进一步研究。此前，来自高加索人群的研究发现，LRP2基因多态性可能会增加AD的发病风险，而在中国汉族人群中却无类似相关性研究。我们采用碱基错配引入酶切位点的限制性片段长度多态性（CRS-RFLP）方法在182例AD患者和179例健康对照人群中，对

6、LRP2基因启动子区rs3755166SNP位点进行检测，结果发现LPR2rs3755166(G>A)等位基因的频率在AD患者和对照组中存在显著差异(P<0.05)。紧接着，我们在Aβ1-42处理后的人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）中发现LRP2蛋白表达的下调；利用小干扰RNA（SiRNA）技术下调LRP2后，可明显增加Aβ1-42诱导的细胞毒性及促凋亡作用，并发现这一机制可能是通过减少AKT的磷酸化来实现的。我们又进一步通过免疫荧光、免疫共沉淀技术（CO-IP）证实LRP2可与AKT结合，

7、且过表达LRP2mini-receptor后，可以有效拮抗Aβ1-42的毒性及促凋亡作用，而AKT抑制剂LY294002则可逆转LRP2的这一拮抗（保护）作用。此外，我们对LPR2蛋白表达的上游调控机制进行了探讨。众所周知，microRNA是蛋白转录后修饰的重要机制，在蛋白表达的调控中发挥着重要的作用。我们通过实时荧光定量PCR检测，发现miR-146a在AD患者外周血单核细胞（PBMC）中较正常对照表达上调，进一步利用生物信息学检索、Westernblot和荧光素酶报告基因实验检测分析，明确m

8、iR-146a可以通过与LRP2mRNA的3’非翻译区（untranslated万方数据上海交通大学医学院博士学位论文region,UTR）结合，从而抑制LRP2的翻译，在SH-SY5Y细胞中，过表达miR-146a可显著下调LRP2的表达水平，影响LRP2的抗凋亡作用，使细胞对Aβ处理后的毒性更显著。综上，LRP2基因多态性在中国汉族人群中可能是AD发病的风险因素；LRP2蛋白具有拮抗Aβ毒性的细胞保护作用；miR-146a在AD患者PBMC中表达上调，可能参与调控了LRP2翻译，从而影响其对