taz通过影响放射状胶质细胞的增殖周期来调节大脑皮层发育

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1、学校代码:10285学号:20134221144SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文（学术学位）TAZ通过影响放射状胶质细胞的增殖周期来调节大脑皮层发育TAZmodulatesgenerationofcorticalneuronsviaregulatingcellcyclelengthofradialglialcellsinthedevelopingcerebralcortex研究生姓名李迪指导教师姓名马全红专业名称神经生物学研究方向神经干细胞的增殖和分化机制研究所在院部医学部神经科学研究所论文提交日期2016年4月8日万方

2、数据TAZ通过影响放射状胶质细胞的增殖周期来调节大脑皮层发育中文摘要TAZ通过影响放射状胶质细胞的增殖周期来调节大脑皮层发育中文摘要目的哺乳动物的大脑皮层是由I-VI层特异性锥体神经元组成的多层结构，这些神经元是由脑室区域的放射状胶质细胞（Radialglialcells，RGCs）经过不对称分裂产生的，并且它们的产生以及迁移有一个明确的时间顺序和空间排布。大脑皮层神经元的生成是一个由内而外的生成模式：早期生成的神经元经过迁移位于皮层深层，而晚期生成的神经元定位在皮层浅层。但目前调控皮层神经元产生的分子机制尚不是很清楚。Transcr

3、iptionalcoactivatorwithPDZ-bindingmotif（TAZ），是一个基于PDZ结合基序的转录共激活因子，其通过调控干细胞的增殖、分化与凋亡参与干细胞的分化和多器官的形成。本论文主要探索TAZ在大脑皮层发育中的调控作用。方法1、收集C57/BL6小鼠胚胎各时期（E12、E14、E16、E18）及P0（出生当天）的脑组织冰冻切片，利用免疫荧光染色及Westernblot技术检测TAZ在皮层的表达位置及表达水平的情况。2、TAZ-/-胎鼠脑体积与同窝TAZ+/+胎鼠脑体积的对比，检测敲除TAZ对大脑体积的影响。3

4、、通过免疫荧光染色的方法，用放射状胶质细胞（RGCs）marker（Pax6）检测放射状胶质细胞的变化情况，用中间前体细胞（IPCs）marker（Tbr2）来检测中间前体细胞的变化情况。4、5-溴-2′-脱氧尿嘧啶核苷（5-Bromo-2′-deoxyuridine;BrdU）可以标记正在进行DNA复制的细胞，用它的相应抗体BrdU通过免疫荧光的方法检测神经干细I万方数据中文摘要TAZ通过影响放射状胶质细胞的增殖周期来调节大脑皮层发育胞的增殖情况，用处在细胞周期中的细胞的标志蛋白Ki67以及有丝分裂期的标志蛋白PH3（Phospho

5、-histoneH3）通过免疫荧光染色再次检测神经干细胞的增殖情况。5、用Pax6/Tbr2分别和BrdU双标，检测放射状胶质细胞和中间前体细胞的增殖情况。6、用BrdU和Ki67双标的免疫荧光技术检测细胞周期出口以及S期的长度。7、用皮层各层神经元的特异性蛋白Tbr1（标记第VI神经元）、Ctip2（标记第V层神经元）以及Cux1（标记II-IV层神经元）通过免疫荧光技术检测各层神经元的变化情况。用星形胶质细胞标志蛋白GFAP、BLBP通过免疫荧光技术检测星形胶质细胞的变化。结果1、TAZ在E12至P0各个时期均在小鼠脑组织中有表达

6、，且表达水平随胚胎年龄增高呈逐渐上升趋势。2、TAZ基因敲除导致小鼠大脑体积减小。3、TAZ基因敲除导致RGCs细胞数目增加。4、TAZ基因敲除引起RGCs细胞周期S期增长、细胞周期出口的降低，从而促进RGCs的增殖。5、TAZ基因敲除导致深层神经元产生延迟。结论敲除TAZ基因会使RGCs细胞周期S期的长度变长，从而导致RGCs细胞不能按时跳出细胞周期去分化为神经元，进而造成深层神经元产生延迟，最终导致胚胎小鼠大脑体积减小。TAZ在大脑皮层发育过程中起着重要作用。关键词：TAZ；大脑皮层；放射状胶质细胞；神经元；细胞周期作者：李迪指导

7、老师：马全红教授II万方数据TAZ通过影响放射状胶质细胞的增殖周期来调节大脑皮层的发育英文摘要TAZmodulatesgenerationofcorticalneuronsviaregulatingcellcyclelengthofradialglialcellsinthedevelopingcerebralcortexAbstractObjectiveThemammaliancortexisamultilaminarstructureconsistingofdistinctlayer-specificcorticalneurons.

8、Theseneuronsaregeneratedfromneuralprogenitorcellsbyasymmetricdivisionfollowingaprecisetemporalsequenceandspati