去甲氧基姜黄素抑制人前列腺癌pc-3细胞增殖及迁移和对人肾动脉血管内皮功能的影响

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1、河北医科大学博士学位论文去甲氧基姜黄素抑制人前列腺癌PC--3细胞增殖及迁移和对人肾动脉血管内皮功能的影响姓名：倪晓辰申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：王士杰201204中文摘要去甲氧基姜黄素抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖及迁移和对人肾动脉血管内皮功能的影响摘要第一部分去甲氧基姜黄素抑制人前列腺癌PC．3细胞增殖目的：本部分通过观察去甲氧基姜黄素(DMC)对PC．3细胞增殖的影响，探讨DMC抑制PC．3细胞增殖的机制方法：为了探讨DMC对前列腺癌细胞PC．3的抗增殖作用，将PC．3细胞用不同浓度的去甲氧基姜黄素(5、

2、10、20、40、80、160rtM)分别孵育12、24、36及48h后进行MTT检测。为进一步研究DMC抑制PC．3细胞增殖的机制，我们分别以不同浓度DMC(20、40、80州)对PC-3细胞处理48h，以40州浓度DMC对PC．3细胞处理12、24、36和48h，利用流式细胞术(flowcytometry，FCM)测定细胞周期。本实验进一步研究了DMC对PC一3细胞的诱导凋亡作用。用含有不同浓度DMC(20、40、80洲)的培养基培养PC。3细胞，利用FCM测定细胞凋亡率。利用Westernblot检测了cleaved

3、caspase3及其底物聚ADP核糖聚合酶(PARP)。结果：MTT结果显示细胞的增殖活力较对照组受到明显抑制(P

4、时间达到48小时时，细胞凋亡水平显著升高。DMC处理组caspase3蛋白剪切体及其底物PARP剪切体水平明显增高。结论：DMC显著抑制PC一3细胞增殖，诱导该细胞G2／M期细胞周期阻滞。DMC能够诱导PC．3细胞凋亡，Caspase3通路可能在其中发挥作用。第二部分去甲氧基姜黄素抑制人前列腺癌PC．3细胞迁移及侵袭目的：通过观察DMC对PC．3细胞迁移及侵袭的影响，初步探讨该药对PC．3细胞迁移及侵袭能力影响的作用机制中文摘要方法：采用伤口愈合实验观察DMC对PC。3细胞水平迁移的作用，采用Transwell跨膜小室，评

5、估DMC对PC．3细胞侵袭能力的影响。采用明胶酶图分析及RT-PCR检测迁移及侵袭相关蛋白MMP．2的表达变化。结果：伤口愈合实验结果显示，同对照组相比，DMC处理组(20、40、80州)，划痕区迁移细胞的数目显著降低(分别为62．3％、49．2％和22．6％)。Transwell实验结果显示，DMC处理组(20，40，80州)细胞浸润能力分别降低了84．7％、48．2％和24．2％。MM．2参与很多肿瘤的迁移过程。为此，我们研究了DMC能否影响MMP．2的活性。明胶酶图结果显示，同对照组相比，DMC处理组MMP．2活性受

6、到抑制。上述结果表明，DMC能够抑制MMP．2活性，并且这种作用可能参与其抑制PC．3细胞的迁移和侵袭的机制。结论：DMC显著抑制PC．3细胞的迁移和侵袭能力，该作用的机制可能与抑制MMP．2的表达有关。第三部分去甲氧基姜黄素改善人肾动脉血管内皮功能的研究目的：探讨DMC对血管内皮功能的影响，并探明该作用的机制。方法：通过DMC对取白高血压患者和血压正常患者的肾动脉环进行刺激，检测DMC对肾动脉的血管张力的影响，用Westernblot分析观察高血压患者肾动脉内NOX．2和NOX．4的表达，用免疫组织化学方法观察NADPH

7、氧化酶亚单位表达的改变，DHE荧光染色检测人肾动脉内活性氧含量，研究DMC是否可以改善肾动脉血管内皮功能。结果：DMC可以显著增加高血压患者肾动脉内皮依赖型减弱的舒张功能，抑制NOX．2及NOX．4的表达，并降低ROS的释放。DMC还可逆转由AngII诱导的NOX．2及NOX．4上调，显著抑制AngII诱导的ROS释放。结论：DMC可通过抑制NADPH氧化酶改善高血压状态下肾动脉血管内皮的功能，逆转AngII诱导的血管功能障碍。关键词：前列腺癌；姜黄素；去甲氧基姜黄素；凋亡；增殖；迁移；高血压；。肾动脉；活性氧族英文摘要D

8、emethoxycurcumininhibitscellproliferation，migrationandInVaSlonInprostateCancercellsandthemeChanismolhnman-一一一一一renovascularendothelialfunctionABSTRACTPa