噪声对特异性敲除外毛细胞mylk基因小鼠听功能及形态学影响的初步研究

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1、东南大学硕士学位论文噪声对特异性敲除外毛细胞Mylk基因小鼠听功能及形态学影响的初步研究姓名：宋大川申请学位级别：硕士专业：临床医学指导教师：高下2012-05-27中文摘要噪声对特异性敲除外毛细胞My脲基因小鼠听功能及形态学影响的初步研究东南大学医学院研究生：宋大川导师：高下【背景】细胞骨架结构在声信号传递过程中起着重要的作用。许多噪声性聋病是。’～由细胞骨架结构改变引起的。毛细胞骨架相关蛋白(以F．action为代表的一系列细胞骨架相关蛋白)的表达在噪声暴露后维持外毛细胞结构的稳定，减轻外毛细胞的损伤中起到重要作用。肌

2、球蛋白轻链激酶(MLCK，myosinlightchainkinase)能够通过磷酸化II型肌球蛋白的轻链及与肌动球蛋白的交互作用来调节细胞骨架。故而我们推断MLCK对噪声暴露所致的听力损伤也可能起到重要的保护作用。【方法】本研究中我们应用Cre／LoxP基因遗传突变系统建立了在耳蜗外毛细胞(outerhaircell，OHC)特异性敲除gytk基因的小鼠。通过高声强噪声实验系统建立噪声性聋实验动物模型，采用听觉电生理测试、耳蜗基底膜铺片、免疫荧光、显微照相及图像分析等技术方法，定量研究实验动物听阈的变化、外毛细胞缺失率。

3、【结果】成功建立-J"gyt足基因敲除组及对照组(CTR)小鼠；听性脑干反应检测结果示：基因未敲除组和基因敲除组在无噪声暴露的条件下，听功能检测无明显差异；基因敲除+噪声组和基因未敲除+噪声组于ld、10d后的ABR闽值较噪声暴露前有明显提高，差异有统计学意义；基因敲除+噪声组在噪声暴露自{『后的阈移较基因未敲除+噪声组高，差异有统计学意义；予耳蜗基底膜铀片荧光染色后发现基因敲除+噪声组和撼因未敲除+噪声组中存在外毛细胞的凋亡、坏死和缺失的细胞，其中基因敲除+噪声组的受损率较明显。【结论】我们推断MLCK作为外毛细胞骨架的

4、重要调节蛋白之一，对噪声性听力中文摘要损伤可能具有保护作用，敲除My腩基因后可增加对噪声性听力损伤的易感性。【关键词】肌球蛋白轻链激酶；细胞骨架；外毛细胞；噪声性听力损失英文摘要EffectofMyosinLightChainKinaseon‘1l‘noise-incIucedhearingl●10SSlnm0USeAbstract[Background]Themaintenanceofcytoskeletalstructureisimportantforacoustictransduction．Noiseinducedh

5、earingloss(NIHL)inmanycasesalecausedbythedysfunctionofcytoskeletalstructure．Mutationsofcytoskeleton·associatedproteinsincludingmyosinVIIahavebeendeterminedinhearingloss．Regulatorofcytoskeletalorganizationmayalsobeimplicatedinthesignaltransductionofhearing．Ithasbee

6、nreportedthatmyosinlightchainkinase(MLCK)iscapableofregulatingcytoskeletonorganizationthroughphosphorylatingregulatorylightchainofmyosinandinteractingwithF-actin．Moreover，outerhaircell(OHC)containslargeamountsofactinandavarietyofmyosin，anditsstereociliarymotilitya

7、ndsomaticmotilityarecloselyrelatedtohearing．SoitseemedlikelythatMLCKmightplayanimportantroleinacoustictransduction．【Methods】Inthisreport，wedeletedMytkgenespecificallyinOHCbyCre／LoxP。mediatedmutagenesis，andanalyzedthesemiceintheaspectsofauditoryfunction，innerearmor

8、phologyandhistology．[Results]WegeneratedknockoutmicewithadeletionofMilkinouterhaircellandthecontrolmice．TheABRthresholdsofgeneknockoutandnormalgroupwith