线粒体18kda转位分子蛋白(tspo)在胶质瘤细胞中的作用及其机理的研究

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1、江苏大学硕士学位论文线粒体18kDa转位分子蛋白（TSPO）在胶质瘤细胞中的作用及其机理的研究姓名：许慧中申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：贺震民；王存祖20120606江苏大学硕士学位论文摘要目的线粒体18kDa转位分子蛋白(TSPO)是一种新的胶质瘤标记，为线粒体凋亡途径中必备的因子，当被外源性配体或药物激活后，可以促进活性氧簇(ROS)和细胞色素C的产生，增加渗透性转运孔(MP即)的通透性，诱导细胞凋亡。以TSPO为研究靶点，通过调节线粒体凋亡途径可以达到抑制胶质瘤生长的目的。本研究通过检测TSPO在胶质瘤中的表达情况，分析其在胶质瘤细胞中的作用和机理，并进一步探

2、讨以TSPO为靶点胶质瘤的治疗。研究分为三个部分：@TSPO在人脑胶质瘤组织标本及U251细胞中的表达；@TSPO在人脑胶质瘤U251细胞中的作用及其机理；③以TSPO为靶点胶质瘤治疗的研究。方法第一部分：采用免疫组化法检测不同级别人脑胶质瘤组织标本中TSPO的表达。在人脑胶质瘤U251细胞中，采用Westernblotting和免疫荧光染色法检测TSPO的表达情况。第二部分：应用终浓度为100、50、25、12．5、6．25、O∥mol／Lpklll95作用于U251细胞，MTT比色法检测细胞增殖活性；台盼兰染色法检测细胞死亡率；Hoechst33342染色和流式细胞仪法检

3、测细胞凋亡；Westernblotting和免疫荧光法检测TSPO表达；线粒体功能检测包括：膜电位(Jc．1染色法)、ATP含量(荧光素酶法)；线粒体ROS检测包括：DCF法(DCFH．DA探针)、GSH(GSH试剂盒)。第三部分：以氯丙咪嗪作江苏大学硕士学位论文为候选药物，用MTT比色法检测不同浓度的氯丙咪嗪对U251细胞增殖活性的影响，根据结果选取二个不同浓度作相关指标的检测，包括细胞形态学变化、细胞死亡计数、细胞凋亡、TSPO的表达、线粒体功能等，方法同上。结果第一部分：在人腩胶质瘤U251细胞中，TSPO亦有明显表达；在不同级别的人脑胶质瘤组织标本中TSPO均有明显的

4、表达，其表达量的多少与肿瘤的恶性程度有一定的相关性。第二部分：pklll95组胶质瘤U251细胞生长旺盛、增殖明显，且凋亡数减少；TSPO表达下降；细胞内ROS降低、膜电位升高、ATP增加，且在一定范围内与药物浓度成正比。第三部分：氯丙咪嗪组胶质瘤U251细胞生长明显抑制，凋亡增加；TSPO表达增加；细胞内ROS升高、膜电位降低、ATP减少，且在一定范围内与药物浓度成正比。结论QTsPo在人脑胶质瘤中存在广泛的表达，是胶质瘤新的标记。②在人脑胶质瘤中，TSPO可以通过调节线粒体功能，促进肿瘤细胞凋亡。③三环类抗抑郁药氯丙咪嗪是以TSPO为靶点而抑制胶质瘤细胞生长的，可以作为胶

5、质瘤治疗的候选药物，同时TSPO亦是治疗胶质瘤的较好靶点。关键词胶质瘤；18kDa转位分子蛋白(TSPO)氯丙咪嗪；1．(2．氯苯基)．N．(1一甲基丙基)一异喹啉一3-氨甲酰；治疗II江苏大学硕士学位论文ObjectiveABSTRACTThe18kDamitochondriatranslocatorprotein(TSPO)isanewmarkerofglioma，andanessentialfactorofmitochondrialapoptosispathway．Whenitwasactivatedbytheexogenousligandordrug，itcanpro

6、motethereactiveoxygenspecies(ROS)andtheCytochromeC，mitochondrialpermeabilitytransitionpore(MPTP)permeabilityincreasesandinducecelltodeath．Bythetarget，toadjustthemitochondrialapoptoticpathwaythencanachievethepurposeofjinhibitiongliomacells．ThisstudyexplorestheexpressionofTSPOinhumanglioma，th

7、roughittoanalyzetheroleandmechanismofTSPOincellsofhumanglioma，furthertOexploresthetherapybyTSPO．Therearethreepartsinthestudy：OTheexpressionlevelofTSPOintissuesliceandU251cellsofhumanglioma；②Theeffectsandmechanismsofthe18kDatranslocatorproteininU251cellso