槐杞黄对iga肾病大鼠足细胞病变的保护作用及机制研究

《槐杞黄对iga肾病大鼠足细胞病变的保护作用及机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、温州医学院硕士学位论文槐杞黄对IgA肾病大鼠足细胞病变的保护作用及机制研究姓名：蓝俊伟申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：林瑞霞；杨青2012-05-23温州医学院硕士学位论文槐杞黄对IgA肾病大鼠足细胞病变的保护作用及机制研究中文摘要目的1．研究足细胞在IgA肾病(IgAnephropathy，IgAN)大鼠肾组织中的病变及TNF一0【、IL一6与足细胞损伤的关系。2．初步观察和探讨槐杞黄(HuaiQiHuang，HQH)在IgAN大鼠模型肾损伤中的保护作用和可能作用机制。方法分组：清洁级sD雌性大鼠4

2、4只，先随机分成四组：正常组即实验对照组(c组)8只，模型组(M组)12只、地塞米松组(D组)12只、槐杞黄组(H组)12只。造模：IgAN大鼠模型的制备及干预：实验第1天起隔日灌服牛血清白蛋白(BovineSerumAlbumin，BSA)400mg／kg，持续8周；于第6周大鼠尾静脉注射BSA20mg／kg，每周1次，持续3次：第6周、第8周尾静脉各注射0．3mg／kg脂多糖(LPS)1次；实验开始后每周皮下注射四氯化碳0．1ml(持续10周)，观察至12周末。M组、H组、D组造模使用的药物如上所述，C组

3、以等量的生理盐水代替造模使用的药物。药物干预：给药方法：D组、H组：在造模过程中，第4周末大鼠开始出现明显的尿蛋白后，到第12周末尿蛋白达到高峰，第13周起D组予地塞米松针2．5mg／kg腹腔注射，每天1次，H组予槐杞黄29／kg(以蒸馏水配制为0．49／mL)每日灌服，其余各组以生理盐水代替，连续4周。检测内容：全自动生化分析仪检测24h尿蛋白，直接免疫荧光法观察肾小球IgA的沉积情况；光镜观察’肾组织病理改变：透射电镜观察足细胞的形态；免疫组化法检测’肾组织足细胞数量的变化，酶联免疫吸附试验(Enzyme

4、LinkedImmunosorbentAssay，ELISA)检测血清肿瘤坏死因子(TumornecrosiSfactoralpha，TNF一0【)、白细胞介素6(Interleukin一6，IL-6)水平。结果1．24h尿蛋白定量结果：造模期间大鼠于第4周末即开始出现明显尿蛋白，并逐周增加，至第12周末达高峰，后趋于稳定，M组与C组比较有显著性差异(P

5、2．免疫荧光：M组大鼠。肾组织均发现IgA沉积，沉积率为100％，荧光强度为(3+～温州医学院硕士学位论文4+)，C组大鼠无明显IgA沉积，D组和H组肾组织均有IgA沉积，沉积率为100％，荧光强度分别为(±"--2+；l+～2+)。3．光镜检查：C组大鼠肾小球体积正常，系膜细胞及基质未见增生，毛细血管袢开放良好，肾间质无淋巴细胞浸润。M组大鼠肾小球体积增大，系膜区明显增宽，系膜细胞和系膜基质中度增生为主，可见肾小球与球囊粘连，偶见细胞新月体形成，肾间质有淋巴细胞浸润。各治疗组大鼠肾小球体积轻度增大，系膜区增

6、宽不明显，系膜细胞和系膜基质以轻度增生为主，无新月体形成和硬化，肾间质有少数淋巴细胞浸润。4．电镜检查：C组肾小球基底膜光滑均匀，未见增厚，足突清晰完整、未见融合，系膜区未见电子致密物沉积。M组肾小球可见足突大部分融合、部分消失，出现部分微绒毛，系膜区可见致密物沉积。H组大鼠肾小球基底膜基本光滑均匀，足突融合减轻；D组足突清晰，甚至接近C组。5．Wilms肿瘤抑制基因(Wilmstumorsuppressorgene，WTI)免疫组化：C组足细胞数(肾小球内WTI阳性细胞)最多，与其他组相比，有统计学意义(只

7、0．05)；M组足细胞数明显低于其他组(尺0．05)，D组与H组之间足细胞数量差异无显著性(P)O．05)。WTl在M组肾小管内可见明显表达，D组、H组肾小管内表达较M组减轻，而C组肾小管未见明显表达。6．ELISA法检测各组大鼠血清中TNF一仅、IL-6水平的变化：M组TNF一0【、IL-6水平明显增高，与其他组相比有统计学意义(P

8、与尿蛋白之间呈负相关(r=-O．789，尺0．05)，足细胞数与TNF—c【之间呈负相关(r一0．645，P