cbp通过调节组蛋白乙酰化水平参与神经病理性疼痛机制的研究

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1、中南大学博士学位论文CBP通过调节组蛋白乙酰化水平参与神经病理性疼痛机制的研究姓名：李倩申请学位级别：博士专业：麻醉学指导教师：郭曲练20120530八年制博士学位论文中文摘要摘要目的构建SD大鼠坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)模型，观察大鼠疼痛行为学及组蛋白乙酰转移酶CBP表达变化趋势。鞘内注射CBPshRNA观察脊髓水平抑制CBP对大鼠神经病理性疼痛以及对组蛋白乙酰化水平、COX．2表达的影响，研究CBP神经病理性疼痛发病的具体机制。方法1．成年雄性SD大鼠30只，随机分为3组：正常组(n=5)、Sham组(n_5)和CCI组(n=20)。CCI组建立左

2、侧CCI模型，Sham组仅暴露左侧坐骨神经而不结扎，术前1天及术后1、3、5、7、10、12、14、21天测定左后足机械痛阈和热痛阈，术后3、7、14、21天分批灌注处死，取腰段脊髓免疫组化方法观察组蛋白乙酰转移酶CBP的表达变化。2．成年雄性SD大鼠40只，鞘内置管成功5天后建立左侧CCI模型，随机分为4组(n=10)：Sham+NS组、CCI+NS组、CCI+NC组、CCI+CBPshRNA组。CCI术后7天鞘内分别注射生理盐水、阴性对照病毒载体(RNAi．NC．LV)、CBPshRNA病毒载体(CBPRNAi．LV)各209l。术前1天、术后3、5、7

3、、1O、12、14天测定大鼠左后足机械痛阈和热痛阈。于CCI术后14天取腰段脊髓，免疫组化法检测CBP、Ac—H3、Ac．H4、COX．2形态学表达的变化，RT-PCR检测CBP、COX一2mRNA水平的变化，westernblot检测COX．2蛋白水平的变化。结果1．与Sham组相比，CCI组大鼠术侧后足机械痛阈和热痛阈明显下降，在术后第7天最明显，持续至第21天(氏O．05)。腰段脊本研究得到国家自然科学基金(编号：81000478)资助I八年制博士学位论文中文摘要髓免疫组化结果表明CBP阳性细胞以灰质表达为主，灰质全层均有表达，脊髓背角I"-'III层

4、高表达，阳性颗粒主要位于胞核，胞浆少量存在。CCI组腰段脊髓背角浅层的CBP阳性细胞数从术后第3天开始明显增多，第14天达到高峰，并持续至第21天(尸0．05)。CCI大鼠腰段脊髓CBP、Ac．H3、Ac—H4、COX一2阳性细胞数以及CBPmRNA、

5、COX一2mRNA、COX一2蛋白均明显升高(尸

6、4．鞘内注射CBPshRNA发挥的镇痛作用可能与抑制CBP对组蛋白H3、H4的乙酰化从而影响疼痛因子COX．2的表达有关。关键词CBP，乙酰化组蛋白，慢病毒，神经痛，RNA小分子干扰八年制博士学位论文英文摘要ABSTRACTObjectivesToinvestigatethetime—dependentvariationtendencyofpainbehaviorandspinalexpressionofCBPinaratmodelofsciaticnervechronicconstrictioninjury(CCI)model．Silencethespin

7、alexpressionofCBPgenebyintrathecalCBPsmallhairpinRNA(shRNA)，toresearchtheeffectofCBPinneuropathicpain．Methods1．ThirtymaleSDratswererandomlydividedintogroupNormal(n=5)，Sham(n=5)andgroupCCI(n=20)．IngroupCCI，leftsciaticnerveCCImodelwereestablishedaccordingtoBennettandXie，ingroupSham，l

8、eftsciaticnerveswereonlyex