帕金森病发病机制中自身抗体靶蛋白的筛选

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1、第三军医大学硕士学位论文帕金森病发病机制中自身抗体靶蛋白的筛选姓名：吴娅申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：史树贵201205第三军医大学硕士学位论文帕金森病发病机制中自身抗体靶蛋白的筛选摘要背景：帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)，又称“震颤麻痹”，是中枢神经系统常见的变性疾病，主要表现为：静止性震颤、运动减少、肌强直、姿势异常。多巴胺神经元的特异性损害，是PD发病的重要特点。近年来的研究提示，帕金森病患者血清和脑脊液中可能存在自身抗体参与对多巴胺神经元的特异性损害。然

2、而，自身抗体攻击的靶目标尚不清楚。目前相关研究发现，脑黑质组织中的蛋白可能是体液免疫中自身抗体攻击的靶蛋白，但该靶蛋白是何种蛋白仍不清楚。鉴于此，我们利用寻找PD患者血清抗体kG与正常志愿者血清kG所结合黑质部位蛋A的差异性蛋A，并对其进行鉴定，初步筛选与帕金森病发病机制有关的自身抗体靶蛋白。旨在初步确定黑质区神经细胞上与帕金森发病相关的靶蛋白，继而为进一步阐明体液免疫在PD发病中的作用提供依据，并为帕金森病的免疫治疗和免疫诊断提供新思路和新策略。目的：筛选出帕金森病发病机制中自身抗体攻击的黑质靶

3、蛋白，进一步阐明体液免疫在帕金森病发病中的作用机制，为更好地理解和揭开帕金森病发病机制和免疫治疗帕金森病奠定理论和实验基础。方法：分别收集临床确诊的帕金森病患者和正常志愿者的血清，用免疫亲和层析法分离出血清堙G；提取正常SD大鼠黑质膜蛋白及胞浆蛋白制备抗原，用westernblot结合免疫沉淀技术筛选出与血清IgG相互作用的蛋A，SDS—PAGE电泳进行蛋A分离后获得差异蛋白条带，质谱鉴定差异蛋白并进行生物信息学分析。结果：(1)PD组与正常志愿者组的血清IgG仅与大鼠黑质结构中的膜蛋A发生结合，

4、而与胞浆蛋白不发生结合。(2)用Western．Blot方法筛选帕金森病与正常志愿者组血清IgG结合大鼠黑质膜蛋白的初步分析，根据此方法未发现二者之间有明显、统一的的特异性差异；(3)在PD组与正常志愿者组两组膜蛋白的免疫沉淀中可以找到一个差异性条带，分子量约为60KDa。(4)利用离子阱串联质谱(HPLC．IRON．TRAP．MS／MS)及生物信息学技术分析，获得了2个候选蛋白：。c微管蛋白(仅一tubuin)和细胞角蛋1刍(cytokeralin)。结论：PD患者血清IgG在大鼠黑质结构中的靶

5、蛋白为膜蛋白，与正常志愿者组4第三军医大学硕士学位论文比较，PD血清IgG与膜蛋白的结合存在差异，表明帕金森病患者的血清kG与黑质结构中的膜蛋A结合，可能参与了PD的发生与进展过程。关键词：帕金森病；血清IgG；黑质膜蛋白；自身抗体；发病机制ScreeningtheautoantigeninsubstantianigrarelatedtoParkinson’SDiseasepathogenesisAbstractBackground：Parkinson’Sdisease(PD)whichalsoc

6、alled”shakingpalsy”，isthecommondegenerationdiseaseofthecentralnervoussystem．Itischaracterizedbythestatictremor,bradykinesia，rigidityandposturalrefleximpairment．ThespecialdamageofdopamineneuronistheimportantcharacteristicofPD．Inrecentyears，someresearch

7、essuggestthattherearesomeautoantibodiesinthePDpatients’serumandspinalfluidwhichmaybeinvolvedinthedamageofdopamineneurons．However，themechanismisnotclear．Accordingtotherecentstudies，theproteinsinthesubstantianigramaybethetargetproteinswhichareattackedby

8、theautoantibodiesinthehumoralimmune，butwestilldonotknowwhichproteinsare．Forthatreason，weseekthedifferentproteinsbetweenthePDpatientsandnormalpeoplesandidentifytheseSOthatwecanpreliminarilyscreentheautoantigenswhichareassociatedwiththemechanism