anti-β2gpiβ2gpi复合物对thp-1细胞的激活作用及其信号转导通路的研究

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1、江苏大学博士学位论文Anti--Β2gpi/β2GPI复合物对THP--1细胞的激活作用及其信号转导通路的研究姓名：王海波申请学位级别：博士专业：临床检验诊断学指导教师：周红20120607摘要摘要目的：本课题组前期工作表明，抗磷脂抗体／抗原复合物(anti．132GPI／112GPI)能够刺激血液单核细胞及单核细胞株THP．1表达TF，成为抗磷脂综合征(APS)血栓形成的机制之一。Toll样受体4(TLR4)及膜联蛋白II(ANX2)作为受体介导了上述过程。本论文重点探讨anti．132GPI

2、／112GPI复合物能否激活THP一1细胞，促进炎性相关因子IL．6、IL．8及TNF一0【表达，从而参与APS的病理过程，并探讨其信号转导途径是否与TLR4相关，进一步确定TLR4与ANX2、132GPI的关系。方法：①利用荧光定量PCR(Real—timePCR)检测anti-132GPI／132GPI诱导THP．1细胞TFmRNA及IL．6、IL一8、TNF．QmRNA的表达，采用免疫荧光法观察IL．6、IL．8及TNF．Q蛋白分泌情况，并观察其时效关系。采用试剂盒检测细胞TF活性。②利用

3、自制的[32GPI胶联亲和层析柱(132GPI—Affi—Gel)分析132GPI与THP-l细胞表面相应受体(TLR4、ANX2)结合情况。@Real—timePCR、Western蛋白印迹检测anti一132GPI／132GPI复合物诱导细胞表达TLR4、MyD88(髓样分化因子88)、MD．2(髓样分化蛋白．2)情况。④采用TLR4特异性拮抗剂TAK242、MD．2拮抗剂紫杉醇观察是否干预anti-132GPI／132GPI复合物激活细胞，抑制促炎因子IL．6、IL．8及TNF．a的表达。

4、结果：(堇)Anti．p2GPI／132GPI复合物(100}tg／m1)显著增加THP．1细胞TFmRNA水平及TF活性(与对照比较p<0．01)；并刺激细胞I江苏大学博士沦文An州讼GP岬12(聃复合物对n田P-l细咆的激活作用及其信争传．宁通路的研究IL．6、IL．8及TNF．amRNA的表达，刺激效应显示时间依赖性，于刺激2h时达到高峰(p

5、于132GPI．Affi．Gel柱，从而被洗脱下来。③Anti-J32GPI／J32GPI复合物(100lxg／m1)刺激THP．1细胞表达TLR4、MyD88、MD．2明显升高(与对照比较p<0．01)。@TAK242(5glVl／L)、紫杉醇(1I，tmol／L)能够拮抗anti．132GPI／132GPI复合物对细胞的刺激效应，降低细胞促炎因子IL．6、IL．8及TNF．IDc的表达(与无拮抗剂比较p<0．01)。结论：·1．Anti．p2GPI／132GPI复合物不仅刺激人单核细胞株TH

6、P—l细胞表达TF、还增加炎性因子IL．6、IL．8、TNF．0【的表达，提示aPL也可通过上调炎性因子的表达参与APS的病理机制。2．TLR4与ANX2作为p2GPI的共受体，介导anti-p2GPI／132GPI复合物激活THP．1细胞的信号转导。3．Anti-132GPI／[32GPI复合物激活THP-l细胞表达TF及IL．6、IL．8、TNF．a过程中，TLR4及其接头蛋白MyD88、MD一2均被诱导表达增加，揭示TLR4及其信号转导通路可以作为新的靶标，用于预防和治疗APS的血栓形成等

7、临床症状。4．TLR4途径拮抗剂TAK242、紫杉醇能够明显抑锘tJanti．132GPI／132GPI复合物对THP．1细胞的激活作用，抑制促凝及炎性分子的表达，为APS血栓防治提供了新思路。摘要关键词：抗磷脂综合征，anti．132GPI／132GPI，炎性分子，Toll受体4膜联蛋白A2，组织因子江苏大学博士论文Anfi-{32GPI／B2GPIg枷lTHP-I细胞的激活作用及其错转导通路的研究ABSTRACTobjective：Ourpreviousstudyhasshownthatan

8、ti-132GPI／132GPIcomplexcouldstimulatebloodmonocytesandmonocyticcelllineTHP-1toexpresstissuefactor(TF)，whichbecomesoneofmechanismsofthrombosisinantiphospholipidsyndrome(APS)．Toll—likereceptor4(TLR4)andannexinA2(ANX2)maybeinvolvedintheseprocessesasrece