bmi-1-sirna对人肺癌a549细胞放射敏感性的影响

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1、苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：毒游Et期：如f2、ftl占苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中

2、心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年月解密后适用本规定。非涉密论文口期：膨72、tt坞．、支移％．f，f扩Bmi一1-siRNA对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响中文摘要目的：研究2、4、6GyX射线照射后不同时间点A549细胞中Bmi—l基因mRNA和蛋白的表达变化。利用RNAi技术抑制Bmi一1基因的表达，观察A549细胞的增殖，探讨RNAi对放射敏

3、感性的影响。方法：用不同剂量(2、4、6Gy)X射线照射体外培养的人肺癌A549细胞株，分别采用实时荧光定量PCR技术和Westernblot技术检测A549细胞照射0、6、12、24、48和72h后Bmi一1mRNA和蛋白的表达水平。利用慢病毒表达体系pLPl／pLP2／VSVG／表达质粒构建针对Bmi—l系列的siRNA重组质粒，稳定转染A549细胞株，流式细胞仪筛选稳定株，采用荧光实时定量PCR技术和Westernblot技术检测干扰后Bmi-1基因的表达。采用MTT法和细胞克隆形成实验检测siRNA干扰Bmi一1基因表达后对A549细胞放射敏感性的影响。结果：1Bmi一1基因mR

4、NA在x射线照射下的表达变化。2、4、6GyX射线照射A549细胞后一定时间内Bmi—lmRNA表达升高。与0h组相比，照射后的48h(除2Gy组)内Bmi一1mRNA表达差异有统计学意义(-8．64⋯

5、感性的影响。构建A5491Bmi一1-siRNA1、A549／Bmi一1--siRNA2、A5491Bmi一1-siRNA3、A5491pSicoR-siRNA重组质粒，转染A549细胞株，流式细胞分选术分选出稳定表达GFP绿色荧光的细胞株，实时荧光定量PCR技术检测出A549／Bmi一1--siRNA3干涉效果最好，相对表达量为0．27t0。02，显著低于对照组、A549／pSicoR--siRNA、A549／中文摘要Bmi一1-siRNA对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响Bmi一1-siRNAl、A549／Bmi一1-siRNA2，而A549／pSicoR-siRNA的干扰效率与对

6、照组相比无统计学差异。Westernblot蛋白印迹技术检测对照组、A549／pSicoR-siRNA、A549／Bmi一1-siRNA3干涉效果，结果显示A549／Bmi一1-siRNA3蛋白表达显著低于对照组和A549／pSicoR-siRNA，与其他两组相比具有统计学差异(P

7、相比在3一d内细胞增殖能力受到抑制(P