α-%2c1-肾上腺素受体激动剂、拮抗剂标记及其初步应用的研究

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1、原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：苌辫日期。关于学位论文使用授权的声明本人同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的印刷件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应

2、遵守此规定)论文作者签名：刍0季誊导师签名：二起日期：礁丑，上：lf山东大学硕士学位论文中文摘要本论文主要分三部分；I．前言。Ⅱ．旺l肾上腺素受体拮抗剂和激动剂的生物素化。Ⅲ．量子点标记a1肾上腺素受体拮抗剂的应用。I．在论文的第一部分首先对单细胞研究意义进行了简单的介绍。其次重点对证1肾上腺素受体及其拮抗剂和激动剂进行了介绍。第三，对荧光探针进行了综述，包括绿色荧光蛋白、AlexaFluor染料和量子点。第四，介绍了量子点标记配体，包括量子点标记配体的方法和生物素化衍生物的制备。Ⅱ．本论文的第二部分对Ⅱl肾上腺素受体拮抗剂、激动剂的生物素化进行了

3、详细的研究，制备了5种全新的可以与链霉亲和素包裹的量子点连接的生物素化配体，为进一步研究活细胞中配体与．al肾上腺素受体作用及其动态行为提供了有力工具。第一部分是生物素化哌唑嗪的合成：哌嗪与48％HBr在室温下反应，然后将反应液升湿至60℃，在lh内分批加入2一氯．4．氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉后开始回流4h得到2．(1-哌嗪)．4-氨基．6，7---甲氧基喹唑啉，产率94．6％。再将所得产物与N一羟基琥珀酰亚胺生物素酯以乙腈为溶剂，在室温下反应过夜得最终产物生物素化哌唑嗪，产率56．4％。目标产物经1HNMR和13CNMR确认结构。第二部分是生

4、物素化去氧肾上腺素的合成：如果生物素化去氧肾上腺素与量子点之间距离太近，当二者连接后，这可能会因为量子点表面与al肾上腺素受体之间存在空间位阻而影响去氧肾上腺素生物素衍生物的生物活性，所以我们合成过程中在衍生物与量子点之间增加了不同长度的连接臂。首先，去氧肾上腺素与乙二醇或一缩二乙二醇的磺酰化产物反应，所得产物在经氨解，最后与N一羟基琥珀酰亚胺生物索酯以乙腈为溶剂，在38℃下反应16h得目标产物，经1HNMR和uC卜m偶确认结构。Ⅲ．本论文的第三部分用第二章所制备的生物素化哌唑嗪，选择链霉亲和素包裹的量子点结合全内反射荧光显微镜，对量子点标记的旺1

5、肾上腺素受体拮抗剂的应用进行了初步研究，在单细胞水平定位了活的HEK293A细胞膜上的a1肾上腺素受体。实验中我们对孵育温度，浓度，时问等多种因素进行了研究。确定了定位HEK293A细胞膜上的a1肾上腺素受体的条件为：孵育时间：lh；孵育温度：37"C；prazosin—QDs浓度：5x10～omol／L。并且证明了prazosin-QD与al肾山东大学硕士学位论文上腺素受体结合的特异性。关键词：al肾上腺素受体；量子点；去氧肾上腺素；哌唑嗪；荧光标记；生物素化6山东大学硕士学位论文ABSTRACTThisthesisincludesthreepa

6、rts：I．Preface．II．ThesynthesisofbiotinylatedIll—adrenergicreceptoragonistandantagonist．HI．Theapplicationof0tl—adrenerglcreceptorantagonistlabeledQDs．InChaperI．ofthisthesis，firstofa11，theresearchsofsinglelivingcellwereintroducedbriefly．Secondly，theernphasesofthischaperisaradrene

7、rglcreceptoranditsagonistandantagonist．Thirdly,thereviewoffluorescentprobesweredelivered，whichincludedGFP,AlexafluorescentdyesandQDs．Fourthly,theQDslabelingofligandswasintroduced，whichincludedthemethodsofQDslabelingligandsandthepreparationsofbiotinylatedderivatives．InChaperlI．

8、，themethodsforthesynthesisofbiotinylated09l-adrenergicrecepto