脂氧素对鼠源性巨噬细胞内tlr4nfκb信号通路影响及其作用机制

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1、学位论文独创性声明学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学

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3、病。目前认为可能与基因易感性宿主对肠道微生物及其代谢产物产生异常的免疫应答有关，并且免疫异常在IBD肠道炎症的发生发展中起重要的作用。近年来有关治疗IBD的新制剂多从调节免疫和炎症反应入手，因此，阐明IBD发病过程的炎症反应及其调控机制，对于寻找IBD治疗新靶点、开辟IBD治疗新途径是极为重要的。迄今为止，传统药物治疗包括抗生素类、5-氨基水杨酸类、肾上腺糖皮质激素以及免疫抑制剂，但疗效不理想、副作用大、患者依从性差；新型药物主要为生物制剂如肿瘤坏死因子α（Tumornecrosisfactor-α，TNF-α）的单抗，但价格昂贵、长期使用的安全性问题尚存争议。

4、因此，我们设想是否可寻找一种内源性的抗炎、促消退调节介质，从而为IBD的治疗提供新的思路？脂氧素(Lipoxins，LXs)是花生四烯酸的重要代谢产物，它在各种炎症相关性疾病组织中广泛表达，能够调节多种炎症相关基因的表达和多种炎性细胞的功能，对炎症反应的及时消退具有重要的作用，被誉为是中性粒细胞介导的组织损伤的“停止信号”或“刹车信号”，在维持机体内环境稳态中起重要的作用。TLRs/NF-κB信号通路与固有免疫及获得性免疫密切相关，既参与机体防御病原体的入侵，又是炎症反应的启动闸门，大量研究表明TLRs/NF-κB信号通路的异常激活在IBD发病中起重要作用。目前

5、，在许多动物及细胞模型中发现LXs能够抑制NF-κB的活化，从而减轻炎症反应，但在IBD中其具体机制又是如何呢，目前尚不清楚，为此，我们进行了本项目的研究。本文旨在体外观察脂氧素及其受体激动剂、拮抗剂对LPS作用的鼠源性巨噬细胞株RAW264.7，明确脂氧素对巨噬细胞中TLR4/NF-κB信号通路的影响及其可能机制，以期为IBD的药物治疗开辟新的思路。研究方法：㈠LPS对巨噬细胞内TLR4/NF-κB信号通路的影响取对数生长期的小鼠巨噬细胞株RAW264.7，用不同浓度的LPS分别作用II万方数据摘要2h、4h、6h后提取细胞蛋白(重复3次)，免疫印迹方法检测T

6、LR4/NF-κB信号通路相关蛋白的表达，以确定LPS作用的最佳浓度和时间点。实验分为以下五组：①对照组：不加任何药物处理巨噬细胞；②实验组1：用10ng/mlLPS处理巨噬细胞；③实验组2：用100ng/mlLPS处理巨噬细胞；④实验组3：用1000ng/mlLPS处理巨噬细胞；⑤实验组4：用10000ng/mlLPS处理巨噬细胞；㈡脂氧素及其受体激动剂、拮抗剂对LPS作用巨噬细胞存活的影响实验分组：①对照组：不加任何药物处理巨噬细胞；②脂氧素（LXA4）组：用300nMLXA4处理巨噬细胞；③脂氧素受体激动剂（BML-111）组：用10μMBML-111处理

7、巨噬细胞；④脂氧素受体拮抗剂（BOC-2）组：用10μMBOC-2处理巨噬细胞；以上四组再分为LPS作用与无LPS作用两组，CCK-8检测LPS的细胞毒性及脂氧素的作用。㈢脂氧素及其受体激动剂、拮抗剂对巨噬细胞内TLR4/NF-κB信号通路、SOCS2及炎症细胞因子分泌的影响⑴实验分组：①对照组：不加任何药物处理巨噬细胞；②脂氧素（LXA4）组：用300nMLXA4处理巨噬细胞；③脂氧素受体激动剂（BML-111）组：用10μMBML-111处理巨噬细胞；④脂氧素受体拮抗剂（BOC-2）组：用10μMBOC-2处理巨噬细胞；上述四组再分为LPS作用与无LPS作用

8、两组，根据第一部分结果取