sdf-1cxcr4erk信号通路对离体培养的海马神经元gaba分泌的影响

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectsofSDF-1／CXCR4／ERKsignalpathwayonsecretionofGABAinculturedhippocampalneuronsByGUOMeixiaSupervisor：Prof．XINGYingNeurobiologyBasicMedicalCollegeofZhengzhouUniversityMay2012原创性声明lIIIIIIIIqllqIIIIIqqllIImY21027m11lllml08本人郑重声明：所

2、呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本人的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式表明。本声明的法律责任由本人承担。⋯⋯c㈣：节碾吼撕㈨岁日学位论文使用授权声本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手

3、段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。学位论文作者(签名)：郭主炙日期：b7埤6月汐日I摘要SDF．1／CXCR4／ERK信号通路对离体培养的海马神经元GABA分泌的影响研究生郭美霞导师邢莹郑州大学基础医学院河南郑州450052要基质细胞衍生因子．1(stromalcellderivedfactor,SDF．1’)是骨髓基质细胞产生的CXC类趋化蛋白，通过作用于其特异性受体CXCR4在调节细胞迁移、信息传递、创伤修复等生理与病理过程中发挥重要作用。已有研究证实，SDF．1及其受体C

4、XCR4在海马组织中广泛表达，可以促进海马神经元的迁移和突起延伸，提示SDF-1可能作为神经调质发挥作用。海马作为学习记忆的中心，其功能与神经递质的分泌有密切关系，因此本实验选用海马神经元作为研究对象，神经递质分泌作为观察对象。有研究发现丫氨基丁酸(丫．aminobutyricacid，GABA)是参与海马学习记忆过程的重要抑制性神经递质，在视网膜、小脑和脊髓以及大脑海马区等部位均有GABA能通路的存在。本实验室最近的研究发现SDF-1可通过作用于CXCR4抑制离体培养的大鼠海马神经元GABA的分泌。有报道在大鼠体内SDF．1作用于CXCR4可引起细胞外调节激酶(ex

5、tracellilar-signal．regulatedkinasesl／2，ERKl／2)信号通路激活，进而调节骨髓间充质干细胞的迁移。但是SDF．1作用于大鼠海马神经元CXCR4是否也通过激活ERKl／2信号通路而引起GABA分泌的改变，目前尚未见报道。目的：观察ERKl／2信号通路激活对SDF-1引起的离体培养的大鼠海马神经元GABA分泌的影响。摘要方法：原代培养大鼠海马神经元并鉴定；采用ELISA方法检测受体CXCR4特异性阻断剂AMD3100和ERKl／2特异性阻断剂PD98059分别作用于离体培养的海马神经元后观察GABA分泌的改变；通过Westernbl

6、ot方法观察ERKl／2信号通路的磷酸化水平；PD98059阻断ERKl／2信号通路后谷氨酸脱羧酶(GAD65／67)和丫．氨基丁酸转运体(GAT)的蛋白表达量；RT-PCR检测PD98059阻断ERKl／2信号通路后GAD65和Q讲lmRNA表达水平。结果：(1)SDF-1可引起海马神经元ERKl／2信号通路磷酸化水平明显升高，AMD3100可抑制SDF．1引起的ERKl／2信号通路激活。(2)SDF．1抑制离体培养的海马神经元GABA的分泌，PD98059可部分逆转SDF-1对GABA分泌的抑制作用。(3)SDF-1可抑制离体培养的海马神经元谷氨酸脱羧酶Q∞65和

7、GAT-lmRNA的表达水平。PD98059可部分逆转SDF-1的抑制作用。(4)SDF-1可抑制海马神经元GAD65／67蛋白的表达，而PD98059可部分逆转SDF．1对GAD65／67蛋白合成的抑制作用。结论：SDF-1能抑制离体培养的海马神经元GABA的分泌，其机制与SDF．1作用于CXCR4受体激活ERK信号通路进而抑制GAD蛋白表达有关。关键词：SDF-1，海马神经元，GABA，ERKl／2ⅡAbstractEffectsofSDF·1／CXCR4／ERKsignalpathwayonsecretionofGABAinculturedhi