s-腺苷-l-甲硫氨酸的分离纯化及其硫酸盐制备的研究

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1、DissertationSubmittedtoZhejiangGongshangUniversityforMaster’SDegreeofEngineeringISoLATIoN，PURIFIC』钢[’IoNOFS．ADENoSYL．L．METHIoNINEANDPREnU王ATIoNoFSAMSULPHATEAuthor：Yu-huiYangMajor：BiochemicalEngineeringSupervisor：Prof．PingYuervlsor：rol,YUJune．2014CollegeofFoodSciencean

2、dBiotechnology,ZhejiangGongshangUniversityHangzhou，310035，China浙江工商大学硕士学位论文S．腺苷一L一甲硫氨酸的分离纯化及其硫酸盐制备的研究摘要S．腺苷．L．甲硫氨酸(s—adenosyl—L—methionine，简称SAM，SAMe或AdoMet)是一种重要的中间代谢产物，广泛存在于各种生物体中，也是人体内一种重要的生理活性物质。本文主要研究了破碎细胞抽提SAM的方法；SAM的分离纯化；SAM硫酸盐的制备；SAM硫酸盐的稳定性。对破碎细胞抽提SAM的方法进行研究表明

3、，采用甲酸进行破碎抽提效果最好，优化得出最佳破碎提取条件：甲酸浓度：O．5mol／L，甲酸用量：1．25BV发酵液体积，破碎时间：90min。SAM提取率以高氯酸的破碎率为1，能达到95％以上。采用离子交换法从细胞提取液中分离纯化SAM。此法相对于传统的使用苦味酸，苦酮酸选择沉淀SAM的方法，提高了SAM的回收率，而且减小了操作的危险性和对环境的污染。研究得出SAM提取液在D113弱酸性阳离子交换树脂上的SAM最佳上柱初始pH值为5．0。以硫酸作为洗脱剂洗脱SAM，得出最佳洗脱条件为0．2mol／L的硫酸，流速2BV／h。SAM洗

4、脱效率为90．3％。采用有机反相沉淀的方法制备SAM硫酸盐，优化SAM硫酸盐的结晶工艺。通过实验得到，选用80％甲醇浓度比例，甲醇用量5BV进行结晶，该条件下结晶状况最好。SAM硫酸盐回收率达到70％以浙江工商大学硕士学位论文上，产品纯度达到91．05％。SAM硫酸盐的稳定性仍受pH和温度的影响。但温度对SAM硫酸盐的稳定性影响较大，随温度升高，降解速率明显加快，损失量显著增加。因此，SAM硫酸盐的保存应在低温(0℃)下保存。本文旨在完善SAM分离纯化工艺，提高SAM破碎提取率，优化整条工艺流程，减少SAM损失，为SAM工业化应用

5、打下良好基础。关键词：s．腺苷．L．甲硫氨酸：SAM；细胞破碎；D113弱酸性阳离子交换树脂；离子交换；分离纯化；SAM硫酸盐；SAM硫酸盐的稳定性浙江工商大学硕士学位论文ISOLATION，PUR【FICATION．0FS—ADENOSYL．L．METHl0NINEANDPREPARATIONOFSAMSULPHATEABSTRACTS-adenosyl—L-methionone(SAM，alsoknownasAdo-Met，SAMe)，animportantmetabolicintermediate，iswidelyfound

6、invariousorganisms．ThecelldisruptionextractionmethodsofSAMandtheseparationandpurificationofSAMwerestudiedinthispaper，togetherwiththepreparationofSAMsulphateandit’Sstability．ThestudyonthecelldisruptionextractionmethodsofSAMindicated，formicacidextractionWasthebestforext

7、raction，andtheoptimalconditionswas：concentrationofformicacid：O．5mol／L，theamountofformicacid：1．25BV，brokentime：90min．TheSAMextractionratecanreachmorethan95％．ComparedwiththetraditionalwayofusingpicricacidorpicrolonicacidtoprecipitateSAMselectively，thismethodnotonlyincre

8、asedtherecovery，butalsodiminishedtheoperationriskandtheenvironmental浙江工商大学硕士学位论文pollution．Itwasshowninthestudythattheoptimal