ros在戊地昔布诱导人乳腺癌mcf-7细胞凋亡中的作用研究

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2、中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导老师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究一编翱撼钾氧年月日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8研究论文ROS在戊地昔布诱导人乳腺癌MCF．7细胞凋亡中的作用研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．99月IJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘材料与

3、方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·14附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·21结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·24参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·24综述COX．2在乳腺癌发生发展的作用及研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37

4、个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38中文摘要ROS在戊地昔布诱导人乳腺癌MCF．7细胞凋亡中的作用研究摘要目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一_．居女性癌症死因第二位。大量流行病学数据和实验显示非甾体类抗炎药可降低乳癌发病率。研究发现环氧合酶．2(COX．2)在人类所生长的许多恶性肿瘤中呈现过度表达的，许多专家猜测，COX-2可能在肿瘤的发生发展的过程中，起着至关重要的作用，研究显示COX。2选择性抑制剂塞来昔布可抑制大鼠乳癌细胞增生，非甾体类抗炎药物除了抑制COX．2外，还可直接靶向调控其他信号

5、通路，如阻断P13刈Akt通路。戊地昔布是第二代COX．2选择性抑制剂，对COX．1抑制作用轻，引起的胃肠道等不良反应轻微，对胃癌和肺癌等有明显的抑制作用。这些关于COX．2的研究均表明：假如COX．2呈现的是高表达，那么通过应用COX-2抑制剂，可以起到抑制肿瘤的生长和增殖的作用，从而增强化疗药物和放疗的敏感性。目前多数研究均认为COX．2抑制剂主要通过抑制其活性发挥抗肿瘤作用，但也有一些研究认为通过非COX．2依赖途径。ROS在肿瘤发生过程中起双重作用，尽管ROS可通过造成DNA损伤和激活癌基因的方式促进癌症发生，但RO

6、S的增高也是诱导肿瘤细胞凋亡的原因之一。戊地昔布是选择性COX．2抑制剂，ROS在戊地昔布抗肿瘤中的作用尚未有报道。在此基础上，本研究主要探讨戊地昔布是否通过调控ROS诱导人乳腺癌细胞的凋亡。方法：l细胞的培养所应用的细胞为人乳腺癌细胞株MCF．7细胞，应用的培养基为含有10％胎牛血清的改良型RPMI1640培养基，培养温度是374C，并且在5％C02饱和湿度培养箱中传代培养。2应用MTT法检测各实验组MCF．7细胞株的生长抑制情况，计算细胞增值抑制率。并检测N．乙酰半胱氨酸，caspase3抑制剂Ac．DEVD．CHO，c

7、aspase抑制剂Z．VAD．FMK对戊地昔布作用的影响。3流式细胞仪检测不同浓度的戊地昔布对MCF．7细胞的凋亡率的影响。中文摘要收集细胞，约106个／组，PBS洗3次，70％预冷的乙醇固定，PI染液(含质量浓度50mg·L。1的PI，体积分数1．O％的TritonX．100和质量浓度10mg·L．1RNaseA)，4℃避光染色30min，流式细胞仪分析结果。4Hoechest染色后用激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡，用JC一1试剂盒检测戊地昔布对线粒体膜电位的影响，应用活性氧检测试剂盒在激光共聚．焦显微镜下检测ROS水平。5

8、Westemblotting免疫印迹方法测定各个实验组caspase．3，cleaved．caspase．3，bax和bcl．2蛋白表达变化情况，用近红外双色激光成像系统分析软件扫描并分析。结果：1我们用MTT方法检测了不同浓度戊地昔布(浓度分别为：0，25，50，100，200，4009