npy-plga缓释微球与人脂肪来源干细胞相容性的研究

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1、万方数据中图分类号UDCR589．2610硕士学位论文学校代码!Q533密级公珏NPY-PLGA缓释微球与人脂肪来源千细胞相容性的研究StudyOnCytocompatibilityofNPY-PLGASustainedReleasingMicrospheresandHumanAdipose--derivedStemCells作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所、)：指导教师：哥

2、J指导教师：梁芳临床医学内分泌学湘雅三医院胡平安副教授刘敏副教授论文答辩日期型丝尘蜀答辩委员会主席中南大学2014年5月／万方数据学位论文原创性声明本人郑重声

3、明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：端日期：2型L年虫丝日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学

4、位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：—盟一苹少一生一年彭一丝莎二签：再H口师期万方数据NPY-PLGA缓释微球与人脂肪来源干细胞相容性的研究摘要目的：(1)从人大网膜脂肪组织中分离提取hADSCs，进行传代培养及成脂成骨化诱导，探讨其特性及作为脂肪组织工程理想种子细胞的优势；(2)通过体外成功构建NPY-PLGA微球缓释系统，检测其释放特性，以确定其具有缓释性能；(3)检测NPY-PLGA缓释微球对hADSCs毒

5、性和凋亡的影响，分析NPY-PLGA缓释微球的细胞相容性，初步探讨其应用于脂肪组织工程研究的可行性。材料与方法：(1)hADSCs的体外分离培养及成脂成骨化鉴定。收集手术病人大网膜的脂肪组织，经I型胶原酶消化、过滤、离心、铺皿后进行原代培养，观察细胞生长状态。取第3代的hADSCs用于实验研究。用细胞计数法绘制hADSCs增殖曲线，计算处于对数生长期的倍增时间。用相应的定向诱导液诱导hADSCs向脂肪细胞及骨细胞方向分化，并用油红O、茜素红染色进行鉴定。(2)体外构建NPY-PLGA缓释微球，并对其性能进行检测。体外用超声乳化的方法制备NPY

6、-PLGA缓释微球，扫描电镜观察微球形态并测量直径；检测微球产率、载药量及包封率；通过ELISA试剂盒检测NPY-PLGA体外缓释性能，检测25d。(3)检测NPY-PLGA缓释微球对hADSCs毒性和凋亡的影响。体外将NPY-PLGA缓释微球的浸渍液加入hADSCs培养液中，用MTT法检测其对hADSCs进行毒性评价；通过AnnexinV-FITC凋亡试剂盒检测NPY-PLGA缓释微球影响下的hADSCs凋亡情况。结果：(1)从手术患者大网膜脂肪组织中成功分离hADSCs，贴壁生长的hADSCs为长梭形，形态类似成纤维细胞。用细胞计数法检测

7、细胞生长增殖能力并根据不同培养天数绘制hADSCs生长曲线，曲线呈S形，对数生长期hADSCs的倍增时间为45．90h。hADSCs经成脂、成骨定向分化诱导液分别诱导2、3周后，分别用油红0、茜素红染色呈阳性反应。(2)体外成功构建NPY-PLGA缓释微球，微球表面光滑、球体大小均匀、形态饱满；微球直径(284．304-36．50)}tm；微球的产率为(20．164-1．45)％，微球样品包封率为(11．614-0．81)％，计算样品的载药量为：{(2．214-0．09)x10。3)％；通过ELISA方法检测微球缓释特性，25d内微球可缓慢释

8、放NPY，首次释放率为10．70％，第25d累计释药率为81．80％。(3、)MTT法检测NPY-PLGA缓释微球对万方数据hADSCs的毒性评价值为0级。AnnexinV-FITC凋亡试剂盒检测缓释微球对hADSCs的影响，实验组与对照组比较，P>0．05，差异无统计学意义。结论：(1)利用原代细胞培养技术成功地从人大网膜脂肪组织中分离提取目的细胞，经形态学及成脂成骨化能力的鉴定证实为hADSCs。该细胞易获取、传代稳定，可作为脂肪组织工程理想的种子细胞。(2)体外超声乳化法成功构建NPY-PLGA缓释微球，缓释性能良好。(3)NPY-PL

9、GA缓释微球与hADSCs相容性良好。图11幅，表9个，参考文献55篇关键词：hADSCs；缓释微球；NPY；NPY-PLGA；PVA；增殖分类号：R589．2II