microrna-204调控惊厥性脑损伤的机制研究

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1、万方数据中图分类号UDC博士学位论文学校代码——密级——microRNA一204调控惊厥性脑损伤的机制研究ThemechanismofmicroRNA一204regulatesthebrain埘u秽inducedbyrecurrentseizures作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：刘玲娟临床医学儿科学湘雅二医院毛定安教授答辩委员会主席—堑至生中南大学二0一四年五月万方数据博士学位论文原创性声明学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰

2、写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：墨!l复蔓丝&日期：2Q醴年』月L日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：量!!影撕导师

3、签名啦万方数据博士学位论文摘要惊厥是婴幼儿期最常见的急危重症，惊厥持续发作可产生严重神经系统后遗症，影响患儿智力发育和身心健康，甚至危及患儿生命。小儿惊厥的发病率很高，约5～6％的小儿曾有过一次或多次惊厥发作史，早产儿甚至高达22．7％～25％。若惊厥发作频繁或持续时间较长，约有15％～30％患儿将最终转变为癫痫。发育期惊厥能够抑制大脑的生长发育，改变神经环路，提高神经元兴奋性，加重大脑损伤，导致视觉能、空间能、学习记忆和情感障碍，若不及时干预，将严重危害到患儿的生命及远期生活质量，给家庭与社会带来沉重负担。就我国人口众多这一国情来说，所面临床的困难较其他国家更为严峻。因此，探索发育期惊厥

4、的发生发展机制及开发新抗惊厥药物成了我们目前迫切需要解决的医学难题。本研究以发育期反复惊厥大鼠为模型，开展惊厥发病机制的相关研究。三氟乙醚吸入致惊是经典的发育期惊厥模型。在先前的实验中，本研究应用TaqManMicr0IⅢAA11rays对发育期反复惊厥后大鼠海马内mi砌妣s表达谱进行检测，在766种己知mi砌蛆中筛选出惊厥后大鼠海马内具有表达差异的miRNA，结果发现，与正常对照组比较，发育期反复惊厥后大鼠海马内有20个已知miRNAs表达下调O．5倍以上，9个mi鼬妊s表达明显上调2倍以上。其中miR．204在海马表达丰富，在反复惊厥后24h表达显著上调至正常组的7倍左右。因此，本实验

5、将进一步观察miR_34b．5p、．204、．582．3p、．672在大鼠海马万方数据博士学位论文摘要及大脑皮质问的差异性表达，同时选取miR-204做为研究对象，更深入探索其在惊厥性脑损伤中的作用及相关机制。第一部分反复惊厥性脑损伤后脑组织内特异性miI矾As表达的改变实验目的：探索发育期反复惊厥后大鼠海马及大脑皮质内特异性miRNAs的表达变化及可能机制。实验方法：1)21日龄SD大鼠70只，将实验仔鼠随机分为2大组，即对照组及惊厥组，每组又随机分为5个时间点，每时间点各6只大鼠。其中惊厥组通过三氟乙醚反复吸入(每天1次，连续6天)制作发育期反复惊厥动物模型，而对照组则经历相同步骤，但

6、不吸入三氟乙醚，最终入组大鼠60只。各组大鼠分别于末次惊厥后2h、6h、24h、72h及7d断头取脑，分离海马及大脑皮质组织。2)分离组织后，提取各时间点海马及大脑皮质组织总RNA，随后进行miR一34b一5p、miR-204、miR-582．3p、miR_672的逆转录，实时定量PCR检测两组织中四种miRNAs的表达。3)体外应用海人酸(100岬ol／1)干预体外培养的PCI2神经元样细胞，实时定量PCR检测干预后0h及24h时细胞内miR-204的表达。4)应用公共靶基因预测软件starBase(h郇：／／starbase．sysu．edu．cn／starbaseVl／clipSeq

7、Imersection．php)对在脑组织中具有丰富表达的miR-204靶基因进行预测，进一步筛选出参与惊厥性脑损伤过程的靶基因。实验结果：海马及大脑皮质内miR-34b．5p及miR-204在末次惊厥后III万方数据博士学位论文摘要2h均开始表达上调p<0．05)，6h时海马及皮质内miR-34b-5p的表达较2h时下调p