NaHS治疗创伤性脑损伤的分子机制研究

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1、分类号：R9单位代码：10343学号：151005812硕士学位论文论文题目:NaHS治疗创伤性脑损伤的分子机制研究研究生姓名：徐科滨学科专业：药学类型：学术型指导教师：张宏宇二O一八年五月温州医科大学硕士学位论文论文题目:NaHS治疗创伤性脑损伤的分子机制研究答辩委员会主席：朱虹教授答辩委员会成员：蔡琳教授刘志国副教授刘彦隆副研究论文答辩日期：2018年5月20日温州医科大学硕士学位论文中文摘要.................................................1英文摘要..............................................

2、...3前言.....................................................6材料与方法...............................................7结果....................................................16分析与讨论..............................................25参考文献................................................28附录......................

3、..............................31致谢....................................................32综述....................................................33参考文献................................................43论文独创性说明..........................................51温州医科大学硕士学位论文NaHS中文摘要目的：脑创伤（Traumaticbraininjury，TBI

4、）是一种极其严重的神经系统功能损伤，由TBI引起的继发性损伤是导致神经元凋亡和神经功能障碍的主要原因。硫化氢（Hydrogensulfide，H2S）是一种具有臭鸡蛋气味气体的介质，是继一氧化氮和一氧化碳后第三种内源性气体信号分子，具有抗炎抗氧化的作用，在中枢神经系统疾病中发挥着重要作用。本文旨在研究NaHS一种H2S的供体，对小鼠脑创伤后是否能修复脑损伤引起的血脑屏障（Blood-brainbarrier，BBB）破坏以及能否保护神经细胞，并探索其中可能参与的分子机制。方法：利用立体定位打击器建立TBI模型以及在细胞上用糖氧剥夺再灌注（OGD/R）模型模拟脑损伤。采用伊文思蓝渗透法、west

5、ernblot、免疫荧光染色等技术研究NaHS是否能维持脑损伤后BBB的完整性，以及参与其中的分子机制。采用了TUNEL、尼氏染色以及Bax、Bcl-2蛋白表达的分析探讨NaHS是否能缓解损伤后神经元的凋亡。通过免疫荧光、westernblot分析MBP、MAP-2研究了NaHS的促髓鞘再生和轴突再生的作用，以及在原代皮层神经元中探讨NaHS的微管稳定作用。通过Mito-tracker对原代HUVEC细胞进行染色，观察NaHS促进线粒体融合的作用，以及通过JC-1染色分析线粒体膜电位（Δψm）和ATP水平的检测验证NaHS维持线粒体功能的作用。通过免疫荧光和westernblot分析LC3Ⅱ/

6、Ⅰ、ATG7、ATG5以及p-AKT和p-mTOR的蛋白水平，探讨了参与NaHS保护作用的信号通路，通过CCK-8检测细胞生存率进一步验证假设。结果：(1)TBI后BBB受到了破坏，在损伤侧及其周围伊文思蓝渗透增加，提前半小时给予1µmol/kgNaHS后再行造模可显著降低伊文思蓝的渗透量。Westernblot表明NaHS上调了紧密连接蛋白（occludin）和粘附蛋白（P120-catenin，β-catenin）的表达，这证实NaHS能维持TBI后BBB的完整性。细胞实验也显示NaHS能上调OGD/R处理过的HUVEC细胞间的连接蛋白和粘附蛋白。此外，通过PDGFR的染色表明NaHS能保

7、护周细胞，通过CD31与Laminin的共定位发现NaHS还能修复脑血管。(2)神经元的凋亡是TBI后的另一大继发性损伤，通过TUNEL染色发现，小鼠损伤侧大脑的海马齿状回（DG）和皮层处的TUNEL阳性细胞在损伤后较1温州医科大学硕士学位论文Sham组急剧增加，而NaHS治疗组的凋亡细胞数量较损伤组显著减少。Westernbolt的结果显示TBI组Bcl-2和Bax比值较sham组显著降低，而N