hcmv经tgfβsmad信号通路对绒毛外滋养细胞smad4表达影响的体外研究

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1、万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·4符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7嘀百言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9月U吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·30讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·35结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·42附图表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”43参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·52致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·60原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61万方数据泰山医学院硕士学位论文HCMV经TGF[I／Smad信号通路对绒毛外滋养

3、细胞Smad4表达影响的体外研究研究生：郭艳霞㈣㈣舢㈣Illlllllllillll专业：妇产科学Y2722525导师：于新艳教授中文摘要目的：通过检测人巨细胞病毒(HCMV)体外感染绒毛外滋养细胞(EVT)Smad4表达水平的变化的研究，初步探究该病毒经TGFl3／Smad信号通路对EVT功能的影响。方法：1、采用复合酶梯度离心法培养原代EVT，通过免疫细胞化学染色检测CK7、c—erbB-2、Vim等蛋白信号以鉴定细胞来源及纯度。2、培养人胚肺成纤维细胞株MRC5以扩增HCMVADl69实验株，并用Reed—Muench法测其病毒半数细胞感染量TCID50。3

4、、EVT被ltCMV感染后，通过免疫荧光细胞化学染色法检测HCMVpp65抗原，判断EVT病毒感染情况。4、MTT法检测并筛选HCMV对EVT细胞体外增殖影响的最小病毒剂量及后续试验的最佳病毒接种量。5、实验分为正常组(EVT)和病毒组(EVT+HCMV)，HCMV接种至EVT细胞48h后，利用免疫细胞荧光技术、实时荧光定量PCR技术、WestemBlot方法检测各组细胞Smad4表达的水平。6、利用体外细胞侵袭实验，研究HCMV感染EVT细胞后，对EVT体外侵袭能力的影响。结果：1、约95％分离培养的原代细胞内均可见CK7和c—erbB-2表达，Vim偶见表达，

5、提示绒毛组织分离培养的细胞为高纯度的EVT。2、病毒HCMVADl69株测定的TCID50为10‘4。2I／0．1ml，即将HCMVADl69病毒稀释104’21接种lOOul可使50％的细胞发生病变。万方数据泰山医学院硕士学位论文3、免疫荧光细胞化学染色结果显示，EVT胞浆内可见大量HCMVpp65抗原荧光信号。4、MTT实验结果显示，与正常组比较，HCMV感染48h后，30ul、40ul、50ul病毒液对EVT增殖抑制作用明显(尸<0．05)，各组问差异无统计学意义(尸>0．05)，故最佳病毒接种剂量为30ul100TCID50HCMV／120u1培养基。5、

6、QT．PCR结果提示，正常组和病毒组中均有TGF—pl、T13RI、T[3RII、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7、MMP2、MMP9mRNA表达。TGF一131mRNA在两组中相对表达量分别为1．000+0．050和1．246+0．045，TI]RImRNA在两组中相对表达量分别为1．001+0．052和1．317+0．051，TIBRIImRNA在两组中相对表达量分别为l，001+0．052和1．296+0．114，Smad2mRNA在两组中相对表达量分别为1．000i0．033和1．380+0．064，Smad4mRNA在两组中相对表达量分别为

7、1．00-J：0．052和1．36+0．080，Smad7mRNA在两组中相对表达量分别为1．317+0．051和1．001士0．052，MMP2mRNA在两组中相对表达量分别为1．000士0．037和0．912+0．016，MMP9mRNA在两组中相对表达量分别为1．000-a：0．037和0．909i0．025，SmadlmRNA在两组中相对表达量分别为1．000+0．120和1．040+0．040，Smad5mRNA在两组中相对表达量分别为1．010a：0．130和1．100-J：0．160，Smad6mRNA在两组中相对表达量分别为1．010-a：0．13

8、0和0．8