h-il-6对神经干细胞增殖、分化与迁移的作用及其分子机制

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1、浙江大学硕士学位论文H-IL-6对神经干细胞增殖、分化与迁移的作用及其分子机制姓名：吴军兵申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：孙益20060601浙江大学硕士学位论文摘要H-IL-6对神经干细胞增殖、分化与迁移的作用及其分子机制本文研究了细胞因子H．IL-6对新生大鼠前脑神经干细胞增殖、体外分化及迁移的影响。在研究中，首先在含碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)和表皮生长因子(epidermalgrowthfactor，EGF)的无血清培养基培养了神经干细胞。神经干细胞以多细胞聚集体的神经球形式存在

2、。将神经球打散成单细胞后培养，能重新增殖形成神经球；使神经球贴壁分化，能产生神经元和胶质细胞；利用神经干细胞特异性的标记Nestin鉴定原代及传代神经球，显示出Nestin阳性。在含EGF+bFGF的培养基中添加H．IL-6来培养神经干细胞发现，H—IL-6能显著促进神经干细胞的增殖；而IL-6、LIF、CNTF等IL-6家族细胞因子却不能。同时利用RT-PCR检测了Notch信号通路相关分子mRNA的相对表达量，结果提示H—IL-6能参与神经干细胞状态的维持。用H．IL-6处理贴壁分化的神经干细胞发现：H．IL-6能抑制Ngn3／Nkx2．2和PLPmRNA

3、的表达，表明H．IL-6可能通过抑制向少突细胞前驱细胞的分化来抑制向少突胶质细胞的分化；但H．IL-6对少突胶质细胞最早前驱细胞的分子标记OligI／Oli92的mRNA和星形胶质细胞的标记GFAP的mRNA无显著影响；H．IL-6还能抑制分化因子NeuroD和NeuroD2mRNA的表达。H．IL-6还能抑制神经干细胞的贴壁迁移，并呈现浓度依赖性；H—IL-6还能抑制趋化因子受体CXCR4mRNA的表达，但对相应配体SDFlamRNA的表达无显著影响。此外，在神经干细胞开始分化后，CXCR4和SDFlamRNA的表达量迅速上调。关键词神经干细胞神经球增殖分化

4、迁移H—IL-6浙江大学硕士学位论文ABSTRA(jrTheeffectsofH-IL-6ontheproliferation，differentiationandmigrationofneuralstemcellsandtheresearchofitsmechanismABSTRACTOurresearchesarefocusedontheeffectofH—IL-6ontheproliferation，differentiationandmigrationofneuralstemcellseqscs)ofnew—bomrats．Firstly,wecult

5、uredtheNSCsinSelqlm—freemediumcontainingbasicfibroblastgrowthfactor(bmF)andepidermalgrowthfactor(EGF)．TheNSCswerefloatedasmulti—cellaggregatescalledneurospheres．Whendissociatedintoasingle—cellsuspensionandreplatedinthemedium，theneumspheresformedagainafterseveraldays．Momove5theneuros

6、phereswereNestinpositiveandcoulddifferentiatetoneuronsandstiawhenseededonpoly—L-lysinecoatedsubstrate．Secondly,wefoundthatH—IL-6couldpromotetheproliferationoftheNSCssignificantlywhenaddedinthemedium，whereasIL-6，LIFandCNTFcouldnot．Besides，theRT-PCRresultsindicatedthatH—IL-6mJ【ghtmodu

7、latethekeymoleculesinNotchsignalingpathwaytomaintaintheNSCs．Thirdly,wefoundthatH-IL-6couldinhibitthemRNAexpressionoftheNgn3，Nkx2．2andPU忸IM一20butnotGFAP,indicatingthatH-IL-6couldsuppressthedifferentiationofNSCstooligodendrocytesbutnotastrocytesviaregulatingtheoligodendrocyteprecursor

8、s(OLPs)．Meanwhile，t