gst融合随机肽库的建立及其抗肿瘤活性研究

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1、兰州大学硕士学位论文GST融合随机肽库的建立及其抗肿瘤活性研究姓名：王明辉申请学位级别：硕士专业：生物物理学指导教师：王勤20060501；¨，onl瓢∞-JF#抖j，}稿p臂；#％，．∥兰州大学硕}学位论文原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均已明确注明出处。除文中已经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声

2、明的法律责任由本人承担。敝储虢协巷㈣锄厶莎兰州人学硕士学位论文关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属于兰州大学。本人完全了解兰州大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为兰州大学。保密论文在解密后应遵守此规

3、定。沦文作者签名够翎撕易日期：加石．‘．j7[中文摘要]肽库的传统建立方法为噬菌体展示技术，这种技术无法将肽库内每个多肽片段单独表达出来并在功能上和结构上加以筛选比较，在大规模应用和比较中无法实现肽库的更多价值，本研究拟利用基因工程的方法建立一种与噬菌体展示技术不同的肽库。在设计随机十五多肽序列后，将多肽序列重组到载体pGEX4T-I中，然后转化重组质粒到E．coliDH5a感受态细胞内，得到的肽库容量在2．5×104左右。我们随机挑取有外源插入的一百个重组质粒，转化到E．coliBL21(DE3)感受态细胞中，以IP

4、TG诱导表达重组蛋白，用SDS—PAGE方法检测多肽表达效率，将有表达的重组蛋白以溶菌酶进行裂解，以SDS—PAGE检测重组蛋白表达方式，取在上清表达的36个重组蛋白利用免疫亲和层析技术以GlutathioneSepharose4B将重组蛋白纯化并利用BSA为参照标准粗定量其浓度，以MTY方法检测其对肿瘤细胞HeLa生长活性的影响，结果显示所纯化的大部分重组蛋白对HeLa肿瘤细胞的生长具有一定的抑制作用。本研究表明利用基因工程方法建立随机15肽库是完全可行的，并对以后多肽的功能研究奠定了良好的基础。关键词：多肽肽库重组

5、蛋白MTI"AbstractTheclassicalconstructionofthepeptidelibraryisthephage—displaytechnology．butwiththismethod，everypeptideinthepeptidelibrarycannotbeexpressedsolelyandscreenedonbasisofitsfunctionandstructure．Furthervalueofthepeptidelibrarycannotbeimplementedintheexten

6、siveapplicationandcomparison．Purposeofourresearchistoconstructapeptidelibrarywiththemethodofthegene—engineeringtechnologywhichisdistinguishingtOthephage-displaytechnology．Inthispeptidelibrary，eachpeptideshouldhavetheintegrityofthefunction，anditsactivitycanbedete

7、cted，itsnumbercallbecounted，anditsappliedvaluecanbeestimatedOnthepremiseoftheserequirements，wedesignthisprojectinaimtoconstructapeptidelibraryanswerfortherequestFirst，designthesequenceoftherandompolypeptides，ligateitintoplasmidpGEX4T-1，thentransformtheplasmidint

8、oDH5Ⅱ，spreadthecellsontotheLB(Amp)agarplates，examinetheefficiencyoftheligationandthetransformation，wecangetthecapabilityofthispeptidelibrary，itisabout25x104．Afterthee