fgf5基因与羊毛性状的关联分析及其对成纤维细胞增殖的影响

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3、关联分析及其对成纤维细胞增殖的影响摘要羊毛长度是决定细毛羊经济价值的关键品质性状之一，羊毛长度的改良一直是细毛羊育种的重要目标。成纤维细胞因子5(Fibrobl勰tGrowthFactor5，FGFS)是调控毛发长度的主要候选基因。本研究以新疆巴州种畜场278只中国美利奴羊为研究对象，采集血液提DNA并测定羊毛自然长度和伸直长度。利用PCR直接测序的方法筛查FGF5基因的遗传变异，并与羊毛长度进行关联分析，探讨FGF5基因变异对毛长的影响，在此基础上，建立了FGF5基因的HRM高通量基因型分析技术体系，为大规模检测FGF

4、5基因突变提供了技术支撑，为羊毛长度的分子育种奠定基础。在细胞水平上，通过在细毛羊成纤维细胞中过表达FGF5基因，FGF5拮抗蛋白FGF5s，分析其对绵羊成纤维细胞增殖的影响，以期在细胞水平研究FGF5的功能。具体研究结果如下：1、通过测序获得中国美利奴羊FGF5的遗传变异，发现在启动子区存在3个SNP位点，对271只中国美利奴羊FGF5基因3个位点进行基因型分析，并与羊毛数据进行关联分析。发现位点1，AA型频率为0．096，GA型为0．399，GG型为0．505；GA基因型的羊毛自然长度极显著高于AA型，GG型显著高于

5、AA型。位点2，AA型频率为0．118，AG型为0．410，GG型为0．472；GG型的羊毛自然长度为最长。位点3，GG型频率为0．122，TG型为0．417，TT型为0．461；GG型的羊毛自然长度为最长。2、通过加入2．2uMM矿和20％的参照DNA以优化HRM反应条件，即可以清晰地分辨FGF5基因CC纯合型、TT野生型、CT杂合型。进一步通过PCR测序分析，验证了HRM在绵羊FGF5基因分析的准确性。初步建立了利用HRM检测绵羊FGF5基因突变的技术体系，为后续试验提供了技术支撑。3、细胞生长曲线显示，过表达FGF

6、5s能显著提高绵羊成纤维细胞的生长，在第24h一72h细胞成上升趋势；而过表达的FGFS能显著抑制成纤维细胞生长，在第24．72h的细胞增殖数量显著低于FGF5s，FGF5s竞争性的结合FGF5的受体，从而抑制FGF5的功能。综上，本研究获得了中国美利奴羊FGF5基因的遗传变异，并发现启动子区具体SNP位点与羊毛长度存在显著的相关性，初步建立了适用于FGF5基因变异分析了HRM技万方数据术体系，为大规模检测分析FGF5基因变异提供了技术支撑。在细胞水平上，初步证明了FGF5基因能够显著影响成纤维细胞的生长。关键词：FGF

7、5；SNP；关联分析；HRM；成纤维细胞；细胞增殖万方数据TheasscociationanalysisofFGF5genewithwooltraitsinsheepandeffectofFGF5onproliferationofsheepfibroblastAbstractLengthisoneofkeyqualitiestodeterminethewoolvMue，SO1eIlgthimprovementisallimportantgoalinsheepbreeding．Fibroblastgrowthfactor5

8、(FibroblastGrowthFactor-5，FGF5)isacandidategenetoregulatesheepwoollength．Inthisstudy,naturewoollengthandstretchedlengthof278ChineseMerinosheepatBazhoubreedingf