dribbles(hbv+)疫苗治疗hbv感染的实验研究

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1、隶．初大·坚硕士学位论文万方数据DRibbles(HBV+)疫苗治疗HBV感染的实验研究专业名称：免疫学研究生姓名：殷鹏飞导师姓名：王立新2014年5月万方数据ExperimentalStudyonAnti--HBVEfficacyInducedbyDRibbles(HBV+)VaccineAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicineByYinPengfeiSupervisedbyProf．WangLix

2、inSchoolofMedicineSoutheastUniversityMay2014万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：惑啤丝日东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所

3、、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名羁咄师签名：哆t6日期：≯(q．堂，弓。万方数据中文摘要来源于肿瘤细胞或者病毒感染细胞的自噬小体在肿瘤及病毒抗原的交叉递呈过程中发挥了重要作用【11。采用专利技术从转染HBV的细胞HepG2．2．15中提取的自噬小体类疫苗即

4、DRibbles(HBV+)疫苗，含有丰富的HBV抗原组分，其双层膜结构特点也大大地增强其被抗原提呈细胞摄取的可能。Chen等【21建立的HBV持续感染FVB／N小鼠模型，其HBV抗原可高水平维持50周以上，是理想的模拟I-IBV慢性感染的小鼠模型。本研究拟采用该模型探讨DRibbles(HBV+)疫苗对I-IBV感染的治疗作用。目的：以DRibblcs(HBV+)疫苗作为治疗性疫苗，以持续感染HBV的FVB／N小鼠为动物模型，探讨DRibbles(HBV+)疫苗对HBV急性与慢性感染的治疗作用及其增强策略。

5、方法：1．HBV感染小鼠模型的建立及DRibblcs(HBV+)疫苗诱导野生型小鼠产生免疫应答的实验研究1．1尾静脉高压注射法注射pGEM4Z／HBV1．3质粒于FVB／N小鼠和Balb／c小鼠，ELISA法定期检测血清中HBeAg水平，免疫组织化学染色法分析肝脏细胞HBcAg表达，以监测HBV感染情况；1．2选取野生型FVB／N小鼠，淋巴结注射301-tgDRibbles(HBV+)疫苗进行初免，3天后肌肉注射混有lmg纳米铝佐剂和30pgDRibbles(HBV+)疫苗的100p1PBS悬液进行加强免疫，

6、3天后再以同样方法加强一次。并以PBS与无HBV抗原的DRibbles(I-IBV')免疫小鼠作为对照。末次免疫后第7天取脾脏淋巴细胞并以nBsAgl90-197和HBcAgl29-140抗原肽体外刺激48h，ELISA法测上清刀FN吖含量。2．DRibbles(HBV+)疫苗治疗HBV急性感染的实验研究2．1于FVB／N小鼠感染HBV第5天，按照前述淋巴结注射进行淋巴结初免后2次肌肉注射再加强的治疗方法进行DRibbles(I-IBV+)疫苗免疫，同时以PBS与DRibbles(HBV')免疫治疗作为对照。

7、定期检测血清中HBeAg、ALT；2．2第l8天取脾脏淋巴细胞加入l-IBsAgtgo．197和HBcA9129-140抗原肽体外刺激48h，万方数据东南大学硕士学位论文ELISA法检测上清中IFN-T含量；2．3第32天取肝脏组织，免疫组化技术分析aBoAg+肝细胞的比例，HE染色分析肝脏病理变化。3．DRibbles(HBV+)疫苗治疗HBV慢性感染的实验研究3．1于FVB／N小鼠感染HBV第8周，参照前述方法实施DRibbles(HBV+)疫苗免疫治疗，同时以PBS与DRibblesotBV')免疫治疗

8、作为对照。定期检测血清中HBeAg水平；3．2第10周取脾脏淋巴细胞加入HBsA9190-197和HBcAgl29_140抗原肽体外刺激48h，ELISA法检测上清中IFN-丫含量。4．DRibblesgrIBV+)疫苗联合B／DRibbles(HBV+)治疗HBV慢性感染的研究4．1FVB／N小鼠感染HBV第8周时，淋巴结注射DRibbles(HBV+)疫苗进行初次免疫治疗，并以PBS与DRibb