apelin-apj系统调控vegf、fgf的相关实验研究

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．4符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．6—1厶—，一刚舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23讨论⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．二⋯⋯．．51参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。52综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．58致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．66攻读学位期间发表的学术论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一67原创性声明

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．68母№枷⋯调脚眠肼川瞅』嬲炒嬲研究生：于鹏丽专业：神经生物学导师：白波教授宋文刚教授中文摘要对人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)在体外用apelin进行刺激，研究apelin对人脐静脉内皮细胞增殖的影响以及apelin．APJ系统与血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfacto

4、r，FGF)等血管生成相关因子之间可能的相互作用。方法1．人脐静脉内皮细胞体外培养及处理：采用DMEM培养基(含有10％胎牛血清)于37℃，5％C02培养箱中常规培养人脐静脉内皮细胞，并根据实验需要加入apelin、P13K抑制剂进行干预。在细胞培养过程中用倒置显微镜观察细胞生长状态。2．细胞中VEGF、FGF等血管生成相关性因子表达的测定：培养细胞，并加入不同浓度的apelin作用不同时间，收集培养后72h的细胞，应用逆转录-聚合酶链反应(Reversetranscription—polymerasechainre

5、action，RT-PCR)法，检测人脐静脉内皮细胞中VEGF、FGF等血管生成相关性因子mRNA表达的变化。3．四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测细胞增殖情况：按常规方法培养人脐静脉内皮细胞，以1000个l-fL的密度接种至96孔板，根据不同的刺激条件分组如下：①空白对照组；②实验对照组：③apelin组；④P13K抑制剂组；⑤apelin+P13K抑制剂组。48h后用MTT法检测各组细胞OD值。4．细胞FGFRl蛋白的检测：按照常规方法培养人脐静脉内皮细胞，根据不同的刺激条件分组：实验对照组、1OqMapelin

6、组、25uMP13K抑制剂组和1O_7Mapelin+25uMP13K抑制剂组。24h后用蛋白免疫印迹(Westernblotting)法检测FGFRl蛋白的表达变化。结果1．倒置显微镜观察人脐静脉内皮细胞生长状态良好，镶嵌排列呈“铺路石”样，细胞较大，呈多角形，无重叠生长现象。2．RT．PCR检测发现，VEGF、FGF等血管相关性因子在人脐静脉内皮中均有表达，且表达水平有时间、浓度依赖性，不同浓度的apelin刺激人脐静脉内皮细胞，lh时各目的基因的表达量变化不大，而4h和8h时随浓度的升高而有所增强或减弱，且4h

7、、8h表达量差别不大。其中APJ、VEGF、bFGF、FGFRl和MMP2／9mRNA表达水平随apelin浓度的升高而增加(P<0．05或P<0．01)：TIMPs能调节MMPs的活动，经apelin刺激后，TIMPl／2mRNA表达水平随apelin浓度的升高而减少(PO．05)；②对照组

8、、apelin组、P13K抑制剂组和apelin+P13K抑制剂组各组之间OD值两两比较均有统计学意义(P<0．05或尸<0．01)。4．Westernblotting检测结果显示：①apelin刺激能诱导人脐静脉内皮细胞FGFRl蛋白表达的明显增加(尸