vegf-a,vegf-c及mmp-2表达调控胆管癌增殖、侵袭转移能力及细胞凋亡的实验研究

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1、分类号UDC博士学位论文密级VEGF．A，VEGF．C及MMP．2表达调控胆管癌增殖、侵袭转移能力及细胞凋亡的实验研究StudyoftheVEGF-A，VEGF—CandMMP一2ExpressionRegulateProliferation，Invasion，MetastasisandApoptosisinCholangiocarcinoma作者姓名：肖科学科专业：外科学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：汤恢焕教授中南大学二O一二年五月。O泌、矿彳原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以

2、标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：醐：一链月孚日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。⋯

3、名：耳新签硭晶攀一尹博士学位论文中文摘要摘要背景：胆管癌(cholangiocarcinoma)是较为少见的消化道恶性肿瘤，约占人类全部消化道恶性肿瘤病例总数的2～3％左右。最早由DurandFardel于1840年报道，其来源于胆管上皮细胞，在肝脏及胆道系统的恶性肿瘤中较为常见，约占肝胆系统肿瘤的10％～15％左右。在世界范围内其发病率约为1．2／10万，但近十年来胆管癌的发病率有逐年升高的趋势，在我国其发病率以每年递增5％的速度上升，是消化道肿瘤中上升速度最快的肿瘤。尽管近年来外科手术、化疗、放疗、免疫治疗等在胆管癌的治疗上取得了长足的进步，但由于胆管癌特殊

4、的病理特征和病灶特殊的解剖位置等诸多原因，导致胆管癌患者缺乏早期特异性临床表现及有效的早期诊断手段，当患者出现症状就诊时多数已处于中晚期，难以获得根治性切除，这使得手术后患者3年生存率仅为35％至50％，而5年生存率仅有不到10％，在我国仅有5％左右。因其缺乏有效的综合治疗手段，故诊治水平至今未取得突破性的进展，严重危害了我国人民的健康。因此，研究胆管癌发生、发展、侵袭转移的具体机制，了解胆管癌进展过程中可能的分子步骤，寻求胆管癌恶性转化的靶点及胆管癌的靶向治疗已成为当前研究的热点。血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor

5、，VEGF)参与血管淋巴管生成的各个环节，是目前公认最有效也是最重要的一种促血管生长的特异性因子。在众多肿瘤的发生、发展过程中，VEGF博士学位论文中文摘要都扮演极为重要的角色，而且是肿瘤血管形成最为成重要的始动因子之一。MMP．2基因是基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase，MMPs)家族中最主要也是分布最广的成员，其主要作用是降解细胞外基质，破坏肿瘤细胞侵袭过程中的组织学屏障，进而导致癌细胞突破细胞外基质及基底膜屏障，向临近纤维结缔组织浸润并发生远处转移。在肿瘤细胞的侵袭转移上发挥重要功能。RNAi是一种典型的转录后基因调控方法，因其

6、作用机制为细胞内通过mRNA特异基因序列降解而使目的基因沉默(genesilencing)，故具有极高的靶向性和有效性。目前RNAi技术己经被广泛应用于基因表达转录后调控、基因功能鉴定等热门研究领域，并在许多疾病的基因治疗上显示了巨大的应用前景。目的：第一部分，通过分别检濒,UVEGF．A、VEGF。C和MMP．2在胆管癌组织标本中的表达情况，分析VEGF．A、VEGF．C和MMP．2表达与胆管癌临床病理因素、临床预后的相关性。进一步检测胆管癌组织标本中微血管密度(microvasculardensity，MVD)和微淋巴管密度(microlymphaticve

7、sseldensity，MLVD)，以此来说明ⅦGF-A、VEGF．C和MMP．2蛋白表达在胆管癌的发生、发展和侵袭转移过程中所起到的作用。第二部分，通过RNAi技术构建特异。陛VEGF．siRNA表达载体抑制胆管癌细胞中VEGF基因的表达，并从中筛选出干扰效率最高的小RNA干扰表达质粒。第三部分，通过VEGF．siRNA表达载体下调QBC939胆管癌细胞qbVEGF—A、VEGF．C和MMP．2基因的表博士学位论文中文摘要达，从细胞水平探讨三者在胆管癌发生、发展及侵袭转移的作用机制。方法：1．采用免疫组织化学法检测47例胆管癌组织、40例邻近非癌胆管组织及15

8、fill正常胆管组织中V