jnkc-jun通路及其靶基因bim与puma在氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞凋亡中的实验研究

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMaster(doctor)ThestudyofJNK／c·JunpathwayanditstargetgeneBimandPUMAOHoxidativestressinducedapoptosisofhumanlensepithelialcellsByXinYangSupervisor：Prof．JinsongZhangOphthalmologyTheFirstAffiliatedHospita

2、lofZhengzhouUniversityApril，2012学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：物龛嗍Ⅵ≯年zz，月7日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务产品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关

3、部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：勃锄日期：沙，z年r乙月7日中文摘要JNK／c．Jun通路及其靶基因Bim与PUMA在氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞凋亡中的实验研究博士姓名：杨鑫导师姓名：张金嵩教授郑州大学第一附属医院眼科河南郑州45

4、0052摘要l前言先天性或后天性因素引起的晶状体混浊即为白内障。白内障是目前最常见的致盲和视力残疾的原因之一。白内障的发病机制迄今尚未完全揭示，为了寻求有效的药物疗法，白内障的病因研究已成为眼科研究热点之～。已知多种因素均可诱导白内障的发生，目前认为氧化应激是诱导白内障发生的最初因素。近来对白内障发病机制的研究主要集中在细胞和分子生物学水平。晶状体上皮细胞可以维持整个晶状体的透明性，保持其内环境的稳定，且晶状体上皮细胞的凋亡被认为是除了先天性白内障以外所有类型的白内障发生的细胞学基础，因此防治原发性或后发性白内障的研究重点是

5、如何调控晶状体上皮细胞的凋亡。PUMA、Bim是Bcl．2蛋白家族BH3．only亚家族中重要的促凋亡基因，在多种因素诱导的细胞凋亡启动和多种疾病的发生过程中都发挥着重要的作用。目前尚没有PUMA、Bim在过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞系HLEC．B3凋亡中作用的相关报道，探讨PUMA、Bim对人晶状体上皮细胞凋亡的作用及其诱导表达的途径和机制，进一步阐明白内障发病机制，可以为基因治疗提供前期的理论依据。JNK信号通路参与了多种生理和病理过程，激活后的JNK能激活包括转录中文摘要因子在内的多种效应蛋白，产生生物学效应。C-j

6、un是JNK的主要下游因子，编码的蛋白产物可以构成转录因子AP．1，转录因子AP．1是细胞内JNK／SAPK作用的重要目标。在活化条件下，JNK磷酸化c-jun，并增加其转录活性，c-jun蛋白可以根据不同的细胞类型决定诱导细胞凋亡或者抑制细胞凋亡。有关氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞凋亡中JNK／c-jun通路的变化尚无报道。在不同的细胞中，PUMA、Bim的表达有不同的调节方式，如转录水平、翻译后修饰和蛋白水平的调控等。Bim还可受到多种信号通路的调节，如P13K／Akt、ML＆7ⅢK、RAS／MAPK等。在晶状体上皮细胞

7、的凋亡过程中，氧化应激是通过什么途径介导PUMA、Bim的表达上调，目前尚不清楚，进一步了解介导途径，通过抑制特定转录因子的活性从而抑制PUMA、Bim的表达可能会成为白内障治疗的一种新途径。2目的研究Bim、PUMA在氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞系HLEC．B3凋亡中的作用；探讨JNK／c—Jun信号通路的激活与其靶基因Bim、PUMA在氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞系HLEC．B3凋亡中上调的关系，从而进一步阐明人晶状体上皮细胞凋亡的分子生物学机制。3方法3．1细胞的培养：贴壁HLEC．B3细胞在37℃、5％二氧化碳孵

8、育箱、含10％胎牛血清的DMEM培养基中培养，2～3d以1：2传代1次；3．2细胞凋亡的检测：过氧化氢刺激体外培养的人晶状体上皮细胞，Hoechst33258染色观察细胞形态，凋亡细胞呈现典型的细胞核致密浓染或碎块状致密浓染，计数细胞凋亡率：3．3WesternBlot：采用western