鼠ifn-λ2重组腺病毒载体体内抗肺癌活性研究

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1、江苏大学硕士学位论文鼠IFN--λ2重组腺病毒载体体内抗肺癌活性研究姓名：张金申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：严玉兰20120601江苏大学硕士学位论文摘要目的：观察本实验组构建的鼠IFN．如(mIFN．k)重组腺病毒载体(Ad．mlFN．k)感染小鼠后能否成功表达，并通过重组腺病毒载体Ad．mlFN．如感染至LA795肺腺癌细胞荷瘤鼠内，研究mlFN．k对LA795荷瘤鼠肿瘤细胞增殖的影响及其诱导凋亡、激活机体免疫反应的机制。方法：采用已构建成功的重组腺病毒载体Ad．mlFN一如感染至小鼠体内，采用Westernblot检测mlFN．如基因在小鼠组织内的表达情况，通过小

2、鼠的体重增长情况观察其对小鼠生长的影响；进一步实验将Ad．mlFN．如感染至小鼠肺腺癌细胞LA795的荷瘤鼠内，通过绘制肿瘤生长曲线观察肿瘤细胞的生长速度，2l天后处死小鼠，取小鼠瘤体、脾脏、骨胳肌等组织，HE染色显微镜下观察小鼠瘤体组织、脾脏组织内的病理改变，采用RT-PCR检测小鼠骨骼肌组织及肿瘤组织内mlFN．k的基因表达，Westernblot检测小鼠肿瘤组织mlFN．如的蛋白表达，Tunel凋亡检测试剂盒检测小鼠肿瘤组织的细胞凋亡，流式细胞检测术检测小鼠脾脏免疫细胞NK细胞、CD4+细胞、CD8+细胞的改变。结果：小鼠感染Ad．mlFN．k后在蛋白水平上mlFN．k表达

3、量明显高于对照组，且小鼠生长基本正常：进一步的肿瘤体内实验研究，肿瘤生长曲线示：PBS组感染后14d、21d与Lacz组无明显统计学差异，前两者与Ad．mlFN．k组相比有明显差异(p<0．01)，且Ad．mlFN．k组小鼠瘤体组织中央呈囊样改变，脾脏增大，病理检查显示此组肿瘤坏死增多，脾脏中多核巨细胞增多，白髓增宽：RT-PCRl鼠IFN九重组腺病毒载体体内抗肺癌活性研究结果：Ad．mIFN．k感染组骨骼肌组织及肿瘤组织出现明显约220bp的mlFN．k基因的条带：Westernblot示Ad．mlFN-L2组出现明显27kDa的mlFN．如蛋白的条带；Tunel凋亡检测提示A

4、d．mlFN．如组凋亡明显高于PBS组与Lacz组(p

5、N—kgeneandthechangesinthemicetransfectedbytherecombinantmlFN-如adenovirusvector．AndinfecttherecombinantmIFN一如adenovirusvectorintothemicewithLA795lungadenocarcinomaSOtoresearchitseffectsontheproliferationofLA795cellsandthepathwaysitinducingtheapoptosisinthecancercellsandactivatingtheregulationo

6、ftheimmunologicalcellsinthemice．Methods：Firstly,infectedtherecombinantmlFN-kadenovirusvectorintothemice，observedtheexpressionofthemlFN一如genethroughWesternblot，andwhathappenedtothegrowthofthemice；Secondly,transfectedtherecombinantmlFN-kadenovirusvectorintothemicewithLA795lungadenocarcinoma，obs

7、ervedthegrowthofthetumors，onthe21thday,putthemicetodeath，studiedthepathologicalchangesinthetumorandspleen，detectedthemlFN—kgeneexpressionbyRT-PCRandWesternblot，theapoptosisofthetumorsbyTunel，thechangesoftheimmunologicalcellsinthespleenbytheFl