颈动脉支架置入后血管炎性反应的动态变化及机制研究

《颈动脉支架置入后血管炎性反应的动态变化及机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学博士学位论文颈动脉支架置入后血管炎性反应的动态变化及机制研究姓名：姜帆申请学位级别：博士专业：神经病学指导教师：秦新月201205重庆医科大学博士研究生学位论文颈动脉支架置入术后血管炎性反应的动态变化及机制研究摘要目的：观察颈动脉支架置入术后局部炎症反应的炎症因子及其动态变化，了解MMP一9及其他炎症因子的变化规律及作用时间，为后期药物干预实验提供依据。观察机械损伤的内皮细胞培养上清对THP．1细胞的激活作用，探讨其作为动脉支架置入术后炎症反应的离体模型的可行性。阐明细胞外信号调节激酶1／2(extracellularregulatedkinase1／2，ERKl／2)一转录激

2、活因子ETS样蛋白I(ETS-like-1，ELK-1)通路在机械损伤的内皮细胞培养上清对THP．1细胞的激活并产生基质金属蛋白酶9(MatrixmetalloproteiIlase．9，MMP．9)过程中的作用，从而了解可能的炎症反应作用机制和信号途径。探索血管紧张素酶受体抑制剂(angiotensinreceptorbloker，ARB)类药物替米沙坦对该通路可能的影响，以评估该类药物在预防颈动脉支架置入后血管再狭窄和卒中终点事件中的作用和应用前景。方法：第一部分：对行颈动脉支架置入术的患者分别于术前、术后24小时、术后3个月、术后半年进行随访，采集基本情况、服药情况、临床事件、并发症

3、的发生，并采集外周血血清使用ELISA试剂盒检测炎4重庆医科大学博士研究生学位论文症因子白细胞介素I13(intefleukin．1p，IL．1B)，白细胞介素6(interleukin一6，IL一6)，转化生长因子一B(Transformingfrowthfactor—p，TGF．0)，MMP．9的动态变化，以及采集外周血单核细胞使用流式细胞术检测细胞膜上Toll样受体一4(Tolllikereceptor4，TLR-4)表达情况。第二部分：正常内皮细胞的培养上清作为阴性对照组，检测单核细胞系THP．1细胞在不同程度机械损伤的内皮细胞的培养上清的作用下的对内皮细胞的粘附能力。正常内皮细胞

4、的培养上清作为阴性对照，在机械损伤的内皮细胞培养上清的作用下，transwell体外模型检测THP．1细胞的趋化能力和侵袭能力的变化，免疫荧光检测在这一过程中的ERKl／2的活化及活化部位。第三部分：正常内皮细胞的培养上清作为阴性对照组，westernblot检测单核细胞系THP．1细胞在机械损伤的内皮细胞的培养上清的作用下的磷酸化的ERKl／2(phosphorylationextracellularregulatedkinase1／2，P-ERKl／2)、磷酸化的ELK-1(phosphorylationETS—like·1，P-ELK一1)及MMP．9的表达时间规律。通过PD9805

5、9(EI水1／2阻滞剂)对THP．1阻滞作用，观察其对机械损伤的内皮细胞的培养上清诱导THP．1细胞P．ERKl／2、P．ELK．1及MMP．9表达的影响。噻唑蓝(3-4，5-Dimethylthiazol⋯2yl2，5一diphenyltetrazoliumbromide，MTT)法绘制药物抑制曲线，筛选ARB类药物替米沙坦作用于THP．1细胞的最佳浓度。使用替米沙坦孵育THP．1细胞1小时后，再更换为机械损伤的内皮细胞的培养上清的对其进行刺激，观察P．ERKl／2、P．ELK．1及气重庆医科大学博士研究生学位论文MMP．9的表达变化。结果：第一部分：共有74名患者纳入实验，男性48人，

6、女性26人，平均年龄为66．15±7．39岁，半年随访期内患者中发生短暂性脑缺血发作(transientischemicattack，TIA)l例，死亡1例，卒巾2例，出血倾向3例，未发现血管内再狭窄的患者。炎症因子IL．1B，IL一6，TGF-B，MMP．9在支架置入术后24小时均明显上升(PO．05)，随访显示，在支架置入术后3个月，其表达变化亦不大(P>O．05)。第二部分：机械损伤的内皮细胞培养上清能增强TH

7、P．1细胞的粘附能力，中度损伤组的作用能力最强(P<0．05)。与阴性对照组相比，THP．1细胞趋化能力及侵袭能力也得到了增强(P