转录因子blimp1和bcda在系统性红斑狼疮中高表达的意义研究

《转录因子blimp1和bcda在系统性红斑狼疮中高表达的意义研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学硕士学位论文转录因子Blimp1和BCDA在系统性红斑狼疮中高表达的意义研究姓名：牛晓昶申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：曾照芳201205重庆医科大学硕士学位论文转录因子Blimpl和BCMA在系统性红斑狼疮中高表达意义的研究背景系系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus，SLE)简称红斑狼疮，是由多克隆自身反应性物B细胞介导的自身免疫性疾病，其直接的致病因子是多克隆自身抗体，并以免疫复合物的形式造成多种组织器官损伤。对于引起SLE的确切病因仍然不很明确，但是自身抗体对SLE的发病起到了很重要的作用

2、已是共识。目前临床上治疗SLE最常用的措施是使用非特异性免疫抑制剂、细胞毒药物和激素，尽管这些药物能有效地抑制免疫活性细胞，控制疾病病程，但毒副作用比较明显，另一方面由于用药后自身反应性淋巴细胞持续存在，因此很难达到治愈的目的。近年来针对分化为浆细胞产生抗体的B淋巴细胞治疗红斑狼疮虽然取得了很大进展，但是此策略因为不能有效清除浆细胞，体内长寿浆细胞依然分泌自身抗体，这些抗体可再次激活病理性免疫应答反应，进而导致SLE患者复发，所以寻求针对分泌抗体的浆细胞的新靶己标成为核心问题。目的本研究旨在探索重庆地区活动性系统性红斑狼疮患者，外周血促B正重庆医科大学硕

3、士学位论文淋巴细胞成熟蛋白1(Blimpl／PRDMl)、B淋巴细胞成熟抗原(BCMA)表达和CDl38+浆细胞数量和健康人之间的是否存在差异，揭示PRDMl、BCMA表达与CDl38+浆细胞数量之间的关系。同时通过红斑狼疮动物模型和正常动物对比，了解Blimpl在动物不同组织的表达情况，以及揭示Blimpl与红斑狼疮之间的关系。本研究的开展将明确Blimpl可否成为以浆细胞为靶细胞治疗红斑狼疮，为进一步开发治疗红斑狼疮的新药奠定基础，还可以为治疗其他浆细胞相关疾病的药物设计提供新的策略方法1．收集40例SLE患者血液标本为实验组，30例健康体检血液标本

4、为对照组。提取外周血单个核细胞总RNA、逆转录得到eDNA，再进行荧光定量PCR(FQ．PCR)，根据相对定量法计算PRDM1、BCMAmRNA相对表达情况。2．收集40例SLE患者血液标本为实验组，30例健康体检血液标本为对照组。Ficoll梯度离心收集外周血单个核细胞，按照CD38一FITC，CD56-PE，CD45-PC5；CD19-FITC，CD138-PE，CD45一PC5；IgGl-PE／IgGl一FITC／IgGl一PC5，CD45-PC5三组标记细胞，流式细胞技术研究CDl38+浆细胞量的差异。3．红斑狼疮模型小鼠和正常对照小鼠在16周龄

5、时乙醚麻醉处死，取肾脏、脾脏及淋巴结组织，行免疫组化、免疫印迹、HE染色，观察Blimpl蛋白表达以及病理变化。提取上述组织总RNA，行RT-PCR和气重庆医科大学硕士学位论文电泳，测量Blimpl凝胶光密度OD值，计算模型小鼠和正常小鼠BlimplmRNA表达相对倍数。结果1．经过SPSS13．0统计软件t检验计算得出SLE实验组PRDMl和BCMA的△ct值和体检对照组的△ct值有统计学意义(P

6、实验组的PRDMlmRNA的含量是体检对照组的2．09倍，SLE实验组的BCMAmRNA的含量是体检对照组的1．87倍。2．用流式细胞技术分析，结果提示SLE患者和健康对照者外周血CDl38+浆细胞数量差异明显。3．经Imagepro．Plus6．0软件检测免疫组化(IHC)光密度OD值，结果显示Blimpl蛋白在SLE模型小鼠的肾脏、脾脏及淋巴结组织内表达明显高于正常小鼠，具有统计学意义(P均小于0．05)。其结果显示Blimpl蛋白在SLE模型小鼠的肾脏、淋巴结及脾脏组织表达分别是正常小鼠的1．57、1．86、2．00倍。经quantityone软件

7、分析WesternBlot，PCR产物电泳凝胶的光密度OD值(P均小于0．05)，WesternBlot果结显示Blimpl蛋白在SLE模型小鼠的肾脏、淋巴结及脾脏组织表达分别是正常小鼠的1．54、1．99、2．21倍；BlimplmRNA在SLE模型小鼠的肾脏、淋巴结及脾脏组织表达分别是正常小鼠的1．76、2．02、2．05倍。HE染色结果显示肾脏间质内有少量炎细胞浸润，局灶性浆细胞、6重庆医科大学硕士学位论文淋巴细胞及少量巨噬细胞浸润。偶见肾小球内细胞数增多，基底膜略增厚。淋巴结淋巴滤泡增生，生发中心扩大。脾脏脾小体明、暗区结构正常，偶见红髓中多核巨

8、细胞增生明显，小动脉周增生及出现少量浆细胞。结论1．证实在SLE患者外周血PRD