裙带菜配子体培养条件的优化及孢子体的ssr分析

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1、中国海洋大学硕士学位论文裙带菜配子体培养条件的优化及孢子体的SSR分析姓名：徐静娟申请学位级别：硕士专业：水产养殖指导教师：宫庆礼；刘涛20120601裙带菜配子体培养条件的优化及孢子体的SSR分析摘要裙带菜是我国重要的经济海藻，其营养价值高，市场需求量也逐年增加，而影响裙带菜栽培产业发展的关键问题之一是种苗品质问题。培育新品种是改善裙带菜栽培品质的有效手段。相对于传统方法，单倍体克隆杂交是育苗育种的高效方法。本文以品种培育为出发点，展开以下三部分实验，以期对裙带菜杂交育种工作提供基础数据。1．日本三陆裙带菜配子体克隆扩培

2、条件的优化实验分两步进行。首先对影响裙带菜配子体克隆生长的温度、光照强度进行优化。温度和光强各设置四个梯度，分别为18℃、21℃、24℃、27℃：2500lx、4000lx、5500lx、7000lx，实验采用完全交叉分组设计，共16个处理。结果显示，光强和温度等环境因素对配子体生长有较大影响，并且两因素存在交互作用，对配子体生长影响也很大，但各单一因素的影响又表现出一定的差异性。21℃、25001)【的条件组合是实验中配子体培养的最佳条件。在培养的第5天到第10天之间，裙带菜配子体克隆的细胞增长率最大，所以可在第10天对

3、配子体进行继代培养，使其保持较高的增长率。在第一步实验的基础上，进一步优化影响配子体扩培的初始接种密度、培养方式等条件，最终确定日本三陆裙带菜配子体克隆扩培的最适温度、光强、培养方式和接种密度等条件。本实验设置静置、磁力搅拌和充气悬浮三种培养方式，接种密度设置6个梯度，分别为0．1g／L、0．2∥L、O．4∥L、0．6g／L、O．8∥L、1．0∥L，实验采用完全交叉分组设计，共18个处理。结果显示，培养方式和初始接种密度等条件对配子体生长有较大影响，并且两者存在交互作用，但各单一因素的影响又表现出一定的差异性，初始接种密度

4、为0．1～O．2∥L的充气培养条件是配子体培养的最佳条件组合。所以本实验中，日本三陆裙带菜雌配子体克隆扩培的最适培养条件为：温度21℃、光强2500lx、接种密度0．1～0．2∥L的充气悬浮培养。2．海带微卫星引物对裙带菜群体分析适用性的研究V11为获得用于裙带菜种质结构和遗传多样性分析的微卫星标记，本实验采用近缘物种转移法分析了15个海带微卫星引物在裙带菜中的应用情况。对39个裙带菜个体进行多样性分析，结果显示：标记SSR002和SSRll5不能扩增裙带菜基因组，位点SSRl94能扩增，但不具有多态性，其他12个标记均能

5、扩增裙带菜DNA，且都具有检出多态性，其中9个符合哈迪一温伯格平衡。这9个海带微卫星标记检出的等位基因数为34个，从3到5个不等，平均每个位点扩增得到3．8个等位基因。观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)及多态性信息含量值(PIC)的范围分别为0．238～1．000、0．50肛0．692、0．413卸．780，9个位点提供的多态性较高，适用于裙带菜遗传学研究。3．裙带菜群体的遗传多样性研究通过SSR分子标记初步评估裙带菜主产区栽培群体和野生群体的遗传多样性，为裙带菜将来的品种培育提供参考。29对SSR引物扩增出105个等

6、位位点。四个群体的有效等位基因数(讹)为1．7438～2．0857，多样性指数(肋为O．3810～0．4541，香农指数(D为0．6211～0．7408，多态性位点比率为93．10％～100．oo％。其中多态性最高的是青岛野生种群，尸，EJ值分别是100．00％，0．4541，O．7408，多态性最低的是韩国栽培群体，只E，值分别是93．10％，O．3810，0．6211。以群体间的遗传距离为基础，用非加权类平均法(UPGMA)分别构建群体间的系统树图。AMOVA分析显示，大部分的遗传变异(79．72％)存在于存在于群体内

7、，少部分(20．28％)存在于群体间。GST的值是0．2133，与Fst的值(0．2028)非常接近，基因流(Nm)的值是O．9829，接近于1，这三个值表明群体间的遗传分化程度不高。总体来说，群体内的遗传多样性处于较高水平，而它们之间的遗传分化程度较低。关键词：裙带菜配子体微卫星遗传多样性0ptimizationofthegametophytecultiVationof‰d白r砌p加门口于e疗daandtheSSRanalysisonsporophyte踟加肠p扬刀口f驴幽istheimportantmacroaJgae

8、fortheeconomicbene6tsandthedemalldsareincreasingyearbyye缸Oneoft11ekeyfactorstodeVeloptheindus缸yof踟咖蛔p砌玎口f批翻cultiVationisseedlingsquali何111ee疵ctiVemethod