联合应用靶向vegf-a、ang-2的shrna抑制子宫内膜癌生长的体内外实验

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1、东南大学硕士学位论文联合应用靶向VEGF--A、Ang--2的shRNA抑制子宫内膜癌生长的体内外实验姓名：闫玉华申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：周怀君2012-05-31中义摘要中文摘要联合应用靶向VEGF．A、Ang．2的shRNA抑制子宫内膜癌生长的体内外实验目的子宫内膜癌发病率呈逐年增高趋势，严重影响女性生命健康，因此探讨子宫内膜癌治疗的新措施具有重要的意义。目前大量研究表明在子宫内膜癌肿瘤内VEGF．A、Ang-2等血管生成因子表达升高，且与肿瘤的生长及转移等有密切的关系。本研究构建靶向VEGF．A和Ang-2的shRNA，采用分子生物学技术验证其在子宫内膜癌细胞株Ishi

2、kawa细胞中的治疗有效性，并建立子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠皮下移植瘤模型，进一步证实了联合应用靶向VEGF—A和Ang．2的shRNA显著抑制子宫内膜癌移植瘤的生长，为子宫内膜癌的靶向抗血管生成治疗提供依据。方法体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞株，利用脂质体介导shRNAVEGF．A和shRNAAng．2转染入细胞，以无义随机序列构建的阴性质粒组作为对照，实时定量PCR技术检测VEGF．A、Ang．2mRNA表达水平的变化；Westernblot技术检测VEGF．A、Ang一2蛋白质表达的变化：M1vr法检测VEGF-A、Ang．2下调后对细胞增殖能力的影响；AnnexinV-

3、PE双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡情况；Transwell肿瘤侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。建立子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠皮下移植瘤模型，给予shRNAVEGF-A联合shRNAAng．2治疗，Westernblot技术检测瘤体中VEGF．A、Ang．2蛋白质表达的变化，免疫组化检测微血管密度，各组织器官HE染色观察毒副作用及肿瘤转移情况。．结果在体外实验中，与空白对照组和阿J性质粒组相比，VEGF．A干扰组、Ang．2干扰组、联合干扰组都能从mRNA水平、蛋白水平下调Ishikawa细胞中靶基因的表达。各干扰组都能有效地抑制Ishikawa细胞生长增飧能力和侵袭能力，其中联合干扰组

4、抑制效果更显著，各组对细胞周期和凋亡无明显影响。在体内试验中，与空白对照组和阴性质粒组相比，VEGF．A干扰组、Ang．2干扰组、联合干扰组下调裸鼠皮下移植瘤内靶基凶的蛋白表达，各干扰组移植瘤内微血管密度下降，移植瘤生长得到有效抑制，其中联合干扰组移植瘤肿瘤体积抑制最显著。中文摘要结论在体外实验中，shRNAVEGF-A联合shRNAAng-2转染有效抑制了Ishikawa细胞的生长增殖及侵袭能力；体内试验中，shRNAVEGF·A联合shRNAAng．2给药显著抑制了Ishikawa细胞裸鼠皮下移植瘤中VEGF．A、An902蛋白质表达，抑制移植瘤体内微血管密度，从而抑制肿瘤生长。关键词子宫

5、内膜癌；Ishikawa细胞株；VEGF．A；Ang．2；siRNA英义摘要AbstractTheinhibitedeffectofshRNAtargetingVEGF--AandAng··2combinedinvitroandinvivoofendometrialcarcinomaobjectiveEndometrialcancerisoneofthemostcommonfemalecancers，anditseriouslyendangersthehealthofwomen．SoStudyonthenewtherapeuticapproachesofendometrialcanceriso

6、fgreatsignificance．Manyresearchershaveindicatedthatvascularendothelialgrowthfactorsrelatedtotumorgrowthandmetastasiswereoverexpression，suchasVEGF—AandAng-2．ThisstudyconfirmedtheinhibitedeffectofshRNAtargetingofVEGF—AandAng-2inhumanendometfialcancerinvitroandinvivobymolecularbiologytechniques，anddeep

7、lyinvestigatedcombinationapplicationhadbetterefficacy．Itmayprovidesomeevidencestotargetedanti—angiogenictreatmentinendometrialcancer．Methods1．IshikawacellsweretransfectedwithshRNAVEGF-AandshRNAAng-2or