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《结肠癌特异性噬菌体抗体筛选及鉴定的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、东南大学硕士学位论文结肠癌特异性噬菌体抗体筛选及鉴定的初步研究姓名：钱军申请学位级别：硕士专业：临床医学指导教师：周家华；赵刚2012-05-28结肠癌特异性噬菌体抗体的筛选及鉴定的初步研究中文摘要背景和目的：肿瘤足令球范【
2、；I内，形。霞危害人类生命健康的重人疾病之一，世界上每年冈罹患肿瘤而丧失乍命的人约lI．I总j，EL’：人数的20％。随着f-'F?家们埘原发肿瘤的化长、浸润、转移和复发以及绀织微』1：境等IXl豢研究的逐步深入，1．1it⋯l；J@7．的诊断与治疗方法也取得了很人进腱，r
3、fi，J．已仃的治，jjr．段包括『．术、放疗和化疗等，ft【足这些治疗仍然存存治愈牢低、药物fJ{IJil作⋯人、}
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5、IIl}f牟0移’0复发等晰多¨题。近年来，越来越多的研究提示1t7．i的起源、发生、转移‘j复发的原凶W能是肿j留内存伯：极少量具有li细胞特性的细胞，llJ肿瘤。I：fill／包(TulnorStemCells，TSCs)。肿瘤十细胞有以卜．特点：第一、自我更新能力；第一：、多向分化潜能；第二、高敛瘤性：第【『q、存红：’』干细胞十H似的信号传导通路：第’i、f衍迂徙和
6、转移能／j；：第八、埘射线和药物／fi敏感；第七、多药抗药，陀。CDl33作为⋯{1hZ。xs，fi细{J．LJfl'．J表Ⅲ卡，J÷志物最‘fJ．是竹蜥硼f1瘤rfl发现的，Singh等从神经节胶质瘤、!l!Jl：TJJ2J,炙／：j陶il胞瘤一f-成助地分离{nCDl33111．：
7、,,÷r细胞，)t-94喜∈n!体外允i11．消培芥Jl!；iI-进fJ：细№』．卉养，发现这种细胞能Ji=TjstT,f,经球ff兜降，具自4E{我型新和分化能力，州时能化免j鉴缺陷小鼠体内形成JJlf叫南，t
8、l"bjfi'f．*ltt胞的,i14，钽与原位川Jill,．Ⅲl,bi，一样，而且也能连续f0代。乡j外，研究hi!明CDl33+组t1胞在刖：癌、II,ili癌、结肠癌、前列腺痛、乎L1,5<'7fi,j、喉癌、11jj粥、肾癌等多科-文体瘤研究中发挥重嘤作，I],CDl33成为分离培养和鉴定"hi⋯'．1d。,il：细10xPi；；特异性标志之⋯。近几年针对肿瘤fi细胞的研究，更注重从其分ry'-幂11琏㈧水’r等厅嘶进行分析，结果表I刃CDl33这种细胞表而糕附分子与其他细胞I纠一厂以及
9、肿j亩微』可：境的形成，／i七州参‘甜I，瘤的q-：K、转移、复发、细胞信号，f々导通路的渊‘{j-以及放化，，抵抗的作用。IHⅡ‘k，我们町以从阻断肿瘤二F纯I胞的细胞周期、阻断衍号f簟导通路f{',JiFxi。11,、改变放化疗作J}J化点、f：扰肿瘤j1：细胞微M：境等方【fl『)M芝针刈肿j搿Ii细怆灰illff,ii,上(@JCDl33以及!l,t'Tf；f#1l天途栉的靶阳治疗。所以，制备r：’打特异，rk抗CDl33的人源’f，}，’一兜降抗体Ii。币：要意义。方法：人CDl33足
10、～㈦久跨哦的棚坐I，I仃鹏个K胞外I≤，我们JijPCR扩增CDl33两段JJf旦J't-区，分别将扩增I佝眄段lJf旦)blx：’』PGEX4T-l(6*HIS)质卡蕾结合后将连接J^：物转入BL21人肠卡㈠街一l—JJ一猝，IPTG人}1{：历导袭达，镍{：i{纯化。以纯化后的fj录CDl33。loopl．(HIS)6和CDl33．100p2．(HIS)6蛋白作为靶分子，对噬菌体抗体库进行固相筛选，应用夹心ELISA选择出结合较强的克隆。结果：成功表达出CDl33两段胞外区，经ELISA答定
11、表明纯化后的两段CDl33胞外区抗原与CDl33抗体仃特肄性的结合。凶本次使ItJ的scFv抗体库为无偏·陡的天然文厍，所以采斤j了“轮筛选，fj，J．协轮采_吲I中等的产旷密度，避免高亲和力'f}=tfM表达的慌菌体兜隆丢失。后二t轮的产E格筛选达到了筛选}l的。第“轮噬茵体的投入产出率比第三轮增加了42．5倍。将fi轮筛选获得的多兜隆噬菌体均进行ELISA检测，发现“轮筛选的OD450111／1吸光度值逐f4：JTSt‘⋯r'-iJ"。以第ji轮筛选后挟得的多兜降II,'～．b．I-+⋯1体
12、感染宿卡蔺XLl一blue，挑取jI一}I的fl’L个阿落，制箭⋯10l株堆兜隆t．+u艰t,4--例tt-体抗体，J}jELISA；b!+$JL：JiD抗坞i结介洒·盹，以PiN值>2．1为⋯。陀兜隆，』k汁挑选87个⋯’陀兜隆，阳性率为86．1％。挑取其rf-6个PIN值>8的阳性克隆做进‘步研究。结论：本研究以噬菌体展／J：技术得剑了人源，r仁抗CDl33的单克降抗体，为进一步深入研究该人源化抗f4ii'i；j7t-q复J’学助能及应』
13、JN”IJ一7．1}等奠定了j占础。关键词：CDl3
